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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR扩增效率很低
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Beryl_xu

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by godloveplum at 2014-12-16 09:22:05
我的模板的第一个浓度大概在45ng/ul左右，然后5倍梯度稀释，2倍梯度稀释都做过，cDNA加的是2ul。...

换引物吧。多试几条。实在不行，市场上也有卖的。前段时间还有送验证了的引物的。

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11楼2014-12-17 17:06:46
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Beryl_xu

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
11楼: Originally posted by Beryl_xu at 2014-12-17 17:06:46
换引物吧。多试几条。实在不行，市场上也有卖的。前段时间还有送验证了的引物的。
...

为何引物要这么长？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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12楼2014-12-17 17:29:46
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Beryl_xu

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果引物没问题  应该是实验条件需要优化，退火温度之类的。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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13楼2014-12-17 17:36:32
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Beryl_xu

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

有没有用梯度稀释的模板做标准曲线？
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14楼2014-12-18 12:59:18
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jennifermatt

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

先确定cdna，看溶解曲线。在设计不同引物，制作标准曲线再看一下。
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求是
15楼2014-12-19 11:23:27
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
不知你用的酶是什么酶呢？
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
16楼2014-12-19 16:25:39
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dayulee

木虫 (正式写手)

愚木虫

【答案】应助回帖

一般扩增长度在100-150bp左右，扩增效果会比较好。当然我觉得你的应该很大程度上是引物的问题，建议你更换引物，引物不好，其他条件再摸索也好不到哪里去，结果也不会可靠
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好好学习，天天向上
17楼2014-12-19 16:50:27
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504775490

金虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

估计是引物的问题，没有双峰的引物不见得扩增效率就好，建议重新设计引物再重做看看，可以多设计几对引物试试看，祝实验顺利~~
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18楼2014-12-19 17:54:58
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日子妞儿

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by godloveplum at 2014-12-16 09:19:40
做了溶解曲线，溶解曲线没有双峰，其它参数也都合格，标曲上重复的点也都叠成了一个点，线性相关性也都不错，就是扩增效率上不去...

f非常正常 就是很不稳定  反复多次进行而已
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我是黑妞儿 哈哈
19楼2015-01-30 14:38:54
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

我感觉是你的引物加少了，建议2-5UM的加入
2ul左右。
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
20楼2015-01-30 14:43:47
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