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冰眉儿

木虫 (著名写手)

[求助] 基因扩增

请外面公司帮忙反转录出了菌株的cDNA文库,根据已报道序列设计了扩增其中一基因的引物,但扩增出来的条带不是3的倍数。想请问下是什么原因,cDNA不是不含有内含子了吗?为什么扩出来的会不是3的倍数呢?谢谢!
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冰眉儿

木虫 (著名写手)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by ruan123456 at 2014-12-16 08:38:20
这个和你引物相关,而且有时候可能还会和你的反应体系相关

我的引物是根据已报道的cDNA设计的,应该是跟要扩增的序列是相匹配的。试过不同的退火温度,还是不行。
5楼2015-01-30 14:08:12
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查看全部 5 个回答

bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得是引物的原因,你选择扩增哪一片段就是哪一片段,与3倍没关联。
就好像30长的片段,你扩29长度也可以,就是看引物而已
2楼2014-12-15 15:50:50
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ruan123456

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
冰眉儿: 金币+20, 博学EPI+1, 有帮助, 5 2015-01-30 14:08:26
这个和你引物相关,而且有时候可能还会和你的反应体系相关

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佳人兮,兰芷兮
3楼2014-12-16 08:38:20
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duanguangxin

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我也觉得可能与引物的特异性相关可以把你的引物在pubmed里面blast一下
牛牛牛牛牛
4楼2014-12-16 09:04:34
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