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七小艾

新虫 (小有名气)

[求助] SDS提取放线菌胞内总蛋白为嘛比不加SDS的缓冲液提取的浓度低？？ 已有1人参与

最近在准备双向电泳的样品，发现含2%SDS的lysis buffer 及含8M尿素 4%CHAPS的lysis buffer 提取的放线菌胞内总蛋白浓度还不及什么都不加的缓冲液提的蛋白，而且SDS-PAGE发现前两者有明显的条带丢失，尤其是高分子量的蛋白。照理来说，SDS、尿素、CHAPS，这些都是蛋白增溶的呀，怎么会提取效果反而不好，还有条带丢失呢？？跪求高手解答
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1楼 2014-12-13 19:57:13
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七小艾

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sony2002 at 2014-12-14 01:32:08
SDS的效果应该随最好的。不知你用的SDS的体系是怎么样的？还有，如果你是做2D，怎么可能会用到SDS的裂解液呢？一般会是用Urea吧。如果是用尿素的话，裂完之后可以是37度下放1-2个小时试试看。

SDS裂解是想提高蛋白提取率，提取完以后丙酮沉淀去除SDS，用的是2%SDS，50mM Tris-HCl pH8.0
加了尿素37℃蛋白不是会发生甲酰化的吗？？我用的是8M尿素，4%CHAPS，50mM Tris-HCl pH8.0
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3楼2014-12-14 09:32:13
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sony2002

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
SDS的效果应该随最好的。不知你用的SDS的体系是怎么样的？还有，如果你是做2D，怎么可能会用到SDS的裂解液呢？一般会是用Urea吧。如果是用尿素的话，裂完之后可以是37度下放1-2个小时试试看。
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2楼2014-12-14 01:32:08
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