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iiinf

银虫 (小有名气)

[交流] 摇菌摇不出来!!!

“摇菌毫无成功率可言。和实验室的其他人用一样的菌种,只是筛选条件不一样。最近三个月开始,摇菌很少能成功。而且不管摇出的还是摇不出的,操作都是一样的,所用培养基仪器也是一样的,毫无规律的一会能出,一会出不来。实验室师兄师姐偶尔帮忙做了几次,也是偶尔能摇出来,而且用他们摇出来同一批配的培养基什么的重复实验,结果又摇不出。应该不是操作上的原因。实验毫无重复性可言,令人相当的痛苦!请高手指点分析下,还有可能是哪方面的原因???谢谢”


此外,酶切鉴定过的质粒进行转化,挑斑有时也不能摇起来,但有时又能摇起来。别人也做过,重复性不好。很奇怪。

[ Last edited by iiinf on 2008-5-22 at 23:32 ]
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)



iiinf(金币+1,VIP+0):谢谢提出建议
那就只能换用蒸馏水配培养基.
或者是由于噬菌体污染,天呐,不敢想象啊.
2楼2008-05-22 21:52:51
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zyk_527

银虫 (小有名气)


iiinf(金币+1,VIP+0):谢谢提出建议
能把你的操作步骤详细说一下吗?按理说,摇菌没有什么技术可言,菌种新鲜,温度和摇速其实都有很大的可选择范围。我想是不是贵实验室的菌种太老了呀
3楼2008-05-22 22:05:28
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dorecnu

木虫 (正式写手)


iiinf(金币+1,VIP+0):谢谢提出建议
1.确认是不是有噬菌体污染?
2.先用小的体系培养,转入较大体系。看会不会稳定点?
4楼2008-05-22 22:19:10
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iiinf

银虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by dorecnu at 2008-5-22 22:19:
1.确认是不是有噬菌体污染?
2.先用小的体系培养,转入较大体系。看会不会稳定点?

菌是最普通大肠杆菌,小的体系可以培养,转入较大体系有时就摇不起来,也是很不稳定。划平板可以长出,但是液体培养基摇不出,同一批次配置,很疑惑。

[ Last edited by iiinf on 2008-5-22 at 23:42 ]
5楼2008-05-22 23:34:24
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shenqicc

金虫 (小有名气)


iiinf(金币+1,VIP+0):谢谢回复支持
我最近也老碰到这种问题,很苦恼,我想你是不是可以这样:1.每次接摇瓶的时候,都最好用同一个甘油管中的菌液并且预先混匀(如果甘油管时间太长,最好活化一批新的);2.会不会是各批次中培养基的问题,我配培养基时,有时是预调pH的长,不调的不长,可有时又成了相反的情况,不知道你是否有培养基的影响导致重复性差?
Publish OR Perish!
6楼2008-05-23 08:26:15
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)


iiinf(金币+1,VIP+0):谢谢回复
是不是菌种反复冻融次数太多了?
漫洒英雄泪,相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行?一任俺芒鞋破钵随缘化!
7楼2008-05-23 16:23:25
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dengyougu

木虫 (小有名气)


iiinf(金币+1,VIP+0): 5-11 13:43
我也碰到了这种情况,真的好郁闷,实验做了半年多,还是没什么结果。重组质粒一直不成功。而且和我的导师一直都找不到原因!
8楼2009-05-10 08:57:55
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hulqi

金虫 (正式写手)


iiinf(金币+1,VIP+0): 5-11 13:43
引用回帖:
Originally posted by iiinf at 2008-5-22 23:34:


菌是最普通大肠杆菌,小的体系可以培养,转入较大体系有时就摇不起来,也是很不稳定。划平板可以长出,但是液体培养基摇不出,同一批次配置,很疑惑。

[ Last edited by iiinf on 2008-5-22 at 23 ...

菌的问题。我们这边做转化的500ml的都能摇起来~~~
9楼2009-05-10 09:52:08
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860102jj

木虫 (初入文坛)


iiinf(金币+1,VIP+0): 5-11 13:43
操作条件都一样的话应该是菌的问题了吧?
10楼2009-05-10 10:47:18
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