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skkyy88888

铜虫 (著名写手)

[交流] 盐析实验的操作

谁做过盐析实验?用硫酸桉沉淀的时候是直接加固体还是家液体呢?有详细的操作步骤吗?有金币送.谢谢
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cdl007

木虫 (正式写手)

最常用的是固体硫酸铵加入法。欲从较大体积的粗提取液中沉淀蛋白质时,往往使用固体硫酸铵,加入之前要先将其研成细粉不能有块,要在搅拌下缓慢均匀少量多次地加入,尤其到接近计划饱和度时,加盐的速度更要慢一些,尽量避免局部硫酸铵浓度过大而造成不应有的蛋白质沉淀。盐析后要在冰浴中放置一段时间,待沉淀完全后再离心与过滤。在低浓度硫酸铵中盐析可采用离心分离,高浓度硫酸铵常用过滤方法,因为高浓度硫酸铵密度太大,要使蛋白质完全沉降下来需要较高的离心速度和较长的离心时间。
    各种饱和度下需加固体硫酸铵的量可由附录中查出。硫酸铵浓度的表示方法是以饱和溶液的百分数表示,称为百分饱和度,而不用实际的克数或克分子数,这是由于当固体硫酸铵加到水溶液中去时,会出现相当大的非线性体积变化,计算浓度相当麻烦,为了克服这一困难,有人经过精心测量,确定出1升纯水提高到不同浓度所需加入硫酸铵的量,附录中的实验数据以饱和浓度的百分数表示,使用时十分方便。
2楼2008-05-22 12:20:45
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cdl007

木虫 (正式写手)

3楼2008-05-22 12:21:11
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kangc-y

铜虫 (初入文坛)

直接加固体药剂,边加边搅拌,硫酸胺过量没关系,盐析完了反正要脱盐,最好接凝胶层析,脱盐
4楼2008-05-23 11:35:01
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raindrop8316

金虫 (正式写手)

加固体,少量多次

先秤好量,直接加固体,在磁力搅拌器上缓慢地加,
加之前要把结块的,或者成颗粒的硫酸铵研磨细小
每次的量不要加太多,要等加进去的差不多都溶解了之后再加。

我们做盐析,一般都需要几个小时
书到用时方恨少 钱到月底不够花
5楼2008-05-23 15:57:29
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