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tj751

金虫 (小有名气)

[交流] 硫酸铵沉淀的蛋白为什么不溶解

请教:60%饱和度的硫酸铵沉淀真菌发酵液蛋白后,离心收集沉淀,沉淀用磷酸盐缓冲液溶解时为什么有许多沉淀都溶解不了呢?
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greenspringmi

银虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
lixiaoyi1981(金币+5,VIP+0):对不住,评帖晚了,没给你及时加金币。谢谢你的回答。
1、在发酵液里除了蛋白外还有一些杂质,用硫酸铵沉淀时,杂质也会沉淀下来;
2、一般,在收集到发酵液后,先高速离心一次,看看沉淀多不多,如果多的话,以后收集完发酵液后都要先离心;
3、沉淀溶解后,要离心除掉不溶物质;
4、你的目的蛋白是在发酵液里,那么肯定是可溶的,所以不溶的沉淀就不要理会了;另外处理样品时要保证低温操作,防止目的蛋白变性;
2楼2008-05-21 08:31:27
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tj751

金虫 (小有名气)

谢谢楼上的回答,准备照着做试试看
3楼2008-05-25 12:03:15
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)

是不是你的缓冲液pH不合适呢?
4楼2008-05-25 16:06:08
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fujinga

银虫 (小有名气)

我正在做硫酸铵沉淀,晕!

请教一下,是按照硫酸铵饱和度的常用表中的数据加吗?
从0%饱和度加到20%饱和度,没有出现沉淀,可是溶液的体积已经增大了,再加到30%饱和度时要量新体积并换算需加克数吗?先谢了。
5楼2008-07-14 21:38:20
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