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神秘小麻子

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 请教 自杀性质粒进入宿主菌的方式? 已有3人参与

求助:
    现在想利用自杀性质粒敲出我宿主菌上目的基因, 那么自杀性质粒的导入方式  1: 线性or 环状? 还是都可以了; 2: 利用接合转移还是电转? 还是都可以? 谢谢
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过好每一天
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张文波z

木虫 (正式写手)

新农人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我准备用接合不过还没做过呢,也希望高手赐教啊!

[ 发自小木虫客户端 ]
道虽迩不行不至,事虽小不为不成。
2楼2014-12-07 23:41:25
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dongguolang

新虫 (小有名气)


三亲结合效率高一些
3楼2014-12-08 11:06:31
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神秘小麻子

铁杆木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by dongguolang at 2014-12-08 11:06:31
三亲结合效率高一些

那如果直接电转进去, 环状的质粒可以发生同源交换吗
过好每一天
4楼2014-12-08 11:09:11
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dongguolang

新虫 (小有名气)


可以用抗生素筛选,这样 长得就是结合子了
5楼2014-12-08 15:54:04
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该是线性吧。

接合转移的话,重组质粒转入供体菌;之后 根据接合转移机制,应该是线性质粒(不清楚有没有环状的例子)进入受体菌,发生同源重组。你操作过程中不需要考虑质粒是否线性。

电转的话,应该把质粒线性化之后,再转进受体菌的。
做一个阳光、开朗的小和尚
6楼2014-12-08 21:09:15
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鞠农茶:)

金虫 (初入文坛)

没有做过,也想了解。
need just word,word has word.
7楼2014-12-11 09:52:54
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爱总是年轻

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

将构建好的自杀质粒导入想要敲除的菌中,有多种方法,选择哪一种取决于受体菌。如果已经有报道的详细电转条件,那么采用这种方法就很方便。接合转移主要是通过两种菌之间的物理接触进而转移。很多菌会分泌一些胞外物质来保护自身,这样就会使质粒的导入比较难。目前还是采用接合转移方法比较多,但是这种方法的概率比较低。
总有人要赢,为什么那个不能是我
8楼2017-12-13 21:00:36
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