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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 酵母菌落PCR怎么做啊？我总也P不出来！
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huoxingshizhe

铁虫 (小有名气)

[交流] 酵母菌落PCR怎么做啊？我总也P不出来！

试过冷热处理，0.2%SDS,直接PCR，同实验室的还有用蜗牛酶处理的，都不出啊！有的时候出一个两个，再P其他的又P不出来了！谁有可靠又简单的方法啊？急切盼望！
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1楼 2008-05-20 18:13:53
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
就简单的办法就是直接在平板上挑一点单斑在已经加好酶和引物等所有东西的pcr管里，搅和搅和就行了，能看到一点点菌体就可以。94度5分钟，然后其他的跟你平时PCR一样。
绝对不会有问题的，我们经常做。
不需要做任何前处理。
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2楼2008-05-20 19:52:39
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huoxingshizhe

铁虫 (小有名气)
毕赤酵母呀，这么简单？我做过平行实验的，处理的出了，直接挑的（就像挑大肠杆菌）却没有！
您说能看到一点点菌体，是牙签上沾一点点菌体，还是混合到PCR管中看到一点点菌体呢 ？呵呵！我都快被酵母菌落PCR整疯了！
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3楼2008-05-20 20:55:26
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)
我没有做过毕赤，我做的是酿酒酵母，就是这么简单。我说的是混到PCR管中，牙签上能看到也行。
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4楼2008-05-20 21:40:55
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zyk_527

银虫 (小有名气)
我们做毕赤酵母都是提了基因组DNA才PCR的,以前试过直接挑菌落P,用lycase酶消化2小时P,结果都是不准.楼主假如知道什么好方法,别忘交流啊
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5楼2008-05-21 10:18:01
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huoxingshizhe

铁虫 (小有名气)
好的，好的。我在摸索～～～
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6楼2008-05-21 17:35:00
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