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[求助]
微生物实验
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各位大神求帮忙 我是把猪链球菌的一个蛋白克隆到大肠杆菌里面进行表达的，所用的质粒为pet28a，用的表达载体为BL21，由于蛋白带有信号肽，所以我通过软件分析把信号肽去除了。 在蛋白进行诱导表达时，所用的IPTG浓度为0.5mM，诱导时间为5个小时，诱导的温度是在30和37摄氏度。蛋白的大小为42kDa左右。 两张图分别为His tag标签分别加在载体的C端和N端。由于加在N端，那么我的蛋白加上前面的蛋白序列，那么大小接近46kDa. 我的上样顺序都为C端：1（37摄氏度,IPTG 0.5mM 30摄氏度,IPTG 0.5mM 30摄氏度 IPTG 0) 2（37摄氏度,IPTG 0.5mM 30摄氏度,IPTG 0.5mM 30摄氏度 IPTG 0) 3（37摄氏度,IPTG 0.5mM 30摄氏度,IPTG 0.5mM 30摄氏度 IPTG 0) 上样顺序都为N端:1（37摄氏度,IPTG 0.5mM 30摄氏度,IPTG 0.5mM 30摄氏度 IPTG 0) 2（37摄氏度,IPTG 0.5mM 30摄氏度,IPTG 0.5mM 30摄氏度 IPTG 0) 3（37摄氏度,IPTG 0.5mM 30摄氏度,IPTG 0.5mM 30摄氏度 IPTG 0) 可是诱导出的蛋白大小不对，并且进行蛋白纯化时也纯化不出来，37和30摄氏度诱导的结果也并不一样，但是我去测序，结果却是对的。。。。。。 求各路神仙进行指点，小女子感激不尽，老板是新来的老板，都被骂过好几次了，这种结果我自己实在是理解不了，跪求各位大神给予帮助   28a+C端+sibA蛋白诱导表达11-30-2.jpg  28a+N端+sibA蛋白诱导表达11-30-2.jpg |
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