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zhangchaohai

银虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 735.6
帖子: 40
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虫号: 2335449
注册: 2013-03-10
专业: 兽医药理学与毒理学

[求助] 求助！！如何从大鼠肝脏中提取有活性的肝微粒体酶？

本人采取的方法如下：
大鼠在处死前禁食24小时,用锤子轻敲晕后,迅速背部固定"以下所有操作均在冰浴中进行"腹腔U型剪开,肝门静脉插管,用冰冷的生理盐水迅速经肝门静脉灌洗肝脏,同时下腔静脉剪开一小口,释放灌洗液,当肝脏灌洗至土黄色时,剪下肝脏,用滤纸吸干称重,每克肝脏加入4倍于湿肝重量的冰冷的0.25mol/ L蔗糖溶液,在冰浴中匀浆制备肝匀浆液"肝匀浆液于4℃以下12500×g离心20min,取上清液,加入冰冷的88mmol/L氯化钙(Cacl2)溶液,冰浴中振摇5min,于4℃以下25000×g离心20min,离心,弃去上清液,所得粉红色沉淀即为肝微粒体"将其悬浮于含20%甘油的Tris一HCl缓冲液中,混匀,分装于冷冻管中,置-80℃低温冰箱保存备用。
采用差示光谱法测定p450含量，发现在420nm下有强吸收，根据资料得知该酶失活。通co时候如何操作才能使蛋白不变形，保险粉加入量和时间怎么确定。
求高人指导啊！！！！！