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panyun0617

新虫 (初入文坛)

[求助] 链球菌种特异性PCR鉴定问题 已有1人参与

请问大家,我之前用临床标本进行菌种特异性PCR,用的引物是之前师弟用过的,他之前能扩出来,但是我没有扩出来,只有引物二聚体,条件酶和他一模一样,就是DNA模版不一样,然后我以为是标本的问题,就用了阳性菌株提取DNA进行PCR,还是只有二聚体,没有目的条带,我想请问大家这个是啥原因呢,会不会是因为引物的原因呢,因为引物估计放了两年了,但是引物是干粉,没有进行溶解稀释啊,理论上DNA干粉可以放很久啊,并且我测了我稀释过后的引物的DNA浓度与纯度,都还不错,是什么原因呢,谢谢大家。另外本人还有个问题一直没搞的清楚, 就是NCBI上面关于细菌的种类比如:Streptococcus pneumoniae ST556 chromosome, complete genome,前面的Streptococcus pneumoniae代表的是肺炎链球菌,那后面的ST556 chromosome代表的内容具体是啥,是不同的strain吗?,因为貌似不同的strain基因型不同的样子啊,并且PCR扩增的大小也不一样。谢谢各位
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杨松涛

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

尝试稀释模板浓度,和加大模板浓度试试,或者把DNA样品纯化后PCR  应该能解决问题
靠近 梦想
2楼2016-08-31 21:52:20
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