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91apple

新虫 (初入文坛)

[求助] 阿利新蓝染液与糖胺聚糖为什么不反应 已有2人参与

将阿利新蓝8GX按1.4mg/mL (W/V)溶解于0.5mol/L乙酸钠溶液中,用前需要临
时配制。于试管中分别加入0.2mL含20、40、80、120ug的GAG标准液,空白对照管中加

0.2mL去离子水。准确加入3mL阿利新蓝染液,混勻。反应10min后于480nm比色测定

吸光度,绘制标准曲线。因为我没买到GAG标准品，就用硫酸软骨素和肝素钠来代替做标准曲线，但是加了显色剂反应10分钟之后，吸光度值几乎和空白差不多
有时还会比空白值小，为什么呢?请问哪位大侠知道的，现在实验卡在这了，求帮助！！！！！！！！
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1楼 2014-11-12 20:37:39
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99503102

版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
91apple: 金币+2, ★有帮助 2014-11-13 16:57:34
你说的吸光度和空白差不多是是指所有的不同浓度的标准液还是某些标准液？提几个建议: 一、检查你的染色剂是否过期，或者是否因为贮存不当导致失效；二、480nm可能不是最佳吸收波长，有必要进行一次波段扫描，找出最高吸收峰值。

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微信公众号：食安小屋
2楼2014-11-12 23:44:36
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99503102

版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

忘了说一点，可延长染色时间外看效果。

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微信公众号：食安小屋
3楼2014-11-12 23:45:47
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91apple

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 99503102 at 2014-11-12 23:44:36
你说的吸光度和空白差不多是是指所有的不同浓度的标准液还是某些标准液？提几个建议: 一、检查你的染色剂是否过期，或者是否因为贮存不当导致失效；二、480nm可能不是最佳吸收波长，有必要进行一次波段扫描，找出最 ...

所有标准液浓度都跟空白差不多，我的染色液也是新买的，我看文献和书上的都是480nm ,是不是波长也有可能有误差
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4楼2014-11-13 16:57:07
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91apple

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 99503102 at 2014-11-12 23:45:47
忘了说一点，可延长染色时间外看效果。

文献上说必须在10--30分钟内测完，要不会有很大误差
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5楼2014-11-13 16:59:27
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99503102

版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 91apple at 2014-11-13 16:59:27
文献上说必须在10--30分钟内测完，要不会有很大误差...

关键现在不知道是不是染不上色的问题，适当延长染色时间试试。仪器不同，波长也有可能导致误差。

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微信公众号：食安小屋
6楼2014-11-13 19:01:47
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91apple

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 99503102 at 2014-11-13 19:01:47
关键现在不知道是不是染不上色的问题，适当延长染色时间试试。仪器不同，波长也有可能导致误差。
...

如果我进行波长扫描的话，用的紫外分光光度计，是用什么来进行调基线呢？
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7楼2014-11-16 20:29:21
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99503102

版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
91apple: 金币+2, ★有帮助 2014-11-20 20:39:11
引用回帖:
7楼: Originally posted by 91apple at 2014-11-16 20:29:21
如果我进行波长扫描的话，用的紫外分光光度计，是用什么来进行调基线呢？...

扫描只需要找到吸光度最高的波长值，不用调基线。
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微信公众号：食安小屋
8楼2014-11-16 23:07:33
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91apple

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 99503102 at 2014-11-16 23:07:33
扫描只需要找到吸光度最高的波长值，不用调基线。...

哦哦，谢谢
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9楼2014-11-20 20:38:52
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zhanwenqi123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

您好，我现在也是遇到了同样的情况，我的实验步骤跟你一模一样，结果也是一样，我想问一下，您现在已经解决这个问题了吗？我用了好多方案还是没办法解决，求助啊！！！！
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10楼2015-11-04 09:12:43
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