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bcqq1990

新虫 (小有名气)

[交流] OPD和TMB显色值差太多,不明白。。?求解 已有3人参与

最近做ELISA,用了买的天根的TMB显色液和自己配的OPD显色液,同样的样品,为什么最后测出的OD值差别那么大,TMB的最大值才0.15,OPD测出的最大值为0.7,不是说TMB 的显色比OPD更灵敏吗??自己之前一直用的OPD,但因为它光敏性较强,因此买了TMB使用,但不明白为什么测出的值偏低,太低的值没法做比较,难道是公司的试剂有问题?求大神指点。
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YU圈圈

新虫 (小有名气)


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我想问楼主之前OPD的配置,我一直用的是TMB显色,想用其他底物也试试,谢谢!
2楼2014-11-12 20:51:20
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bcqq1990

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by YU圈圈 at 2014-11-12 20:51:20
我想问楼主之前OPD的配置,我一直用的是TMB显色,想用其他底物也试试,谢谢!

底物缓冲液(调pH5.5):
0.1M柠檬酸钠(2水合,294.11g/mol分子量),

OPD显色液(10ml):(现配现用,避光)
OPD(分子量108.14g/mol)0.004g
底物缓冲液 10ml
30%H2O2 15ul(临用前加)。
这是我的配方,请问你用的TMB显色效果好吗?OD值大约能达到多少,是自己配的吗?
3楼2014-11-13 19:12:08
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我是钢镚

木虫 (正式写手)


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OPD的吸光波长在492nm, TMD的在450nm,楼主在测量时使用的波长都是用的450nm么
4楼2015-01-03 19:42:53
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feiyue122

金虫 (正式写手)


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其实OPD的灵敏性更高的,所以检测OD值会偏高,但是由于它的光敏性比较大,所以没有TMB使用广泛
5楼2015-01-20 10:49:35
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