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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » OPD和TMB显色值差太多，不明白。。？求解
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bcqq1990

新虫 (小有名气)

[交流] OPD和TMB显色值差太多，不明白。。？求解 已有3人参与

最近做ELISA，用了买的天根的TMB显色液和自己配的OPD显色液，同样的样品，为什么最后测出的OD值差别那么大，TMB的最大值才0.15，OPD测出的最大值为0.7，不是说TMB 的显色比OPD更灵敏吗？？自己之前一直用的OPD,但因为它光敏性较强，因此买了TMB使用，但不明白为什么测出的值偏低，太低的值没法做比较，难道是公司的试剂有问题？求大神指点。
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1楼 2014-11-11 20:14:29
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YU圈圈

新虫 (小有名气)
★
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我想问楼主之前OPD的配置，我一直用的是TMB显色，想用其他底物也试试，谢谢！
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2楼2014-11-12 20:51:20
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bcqq1990

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by YU圈圈 at 2014-11-12 20:51:20
我想问楼主之前OPD的配置，我一直用的是TMB显色，想用其他底物也试试，谢谢！

底物缓冲液(调pH5.5)：
0.1M柠檬酸钠（2水合，294.11g/mol分子量），

OPD显色液(10ml)：（现配现用，避光）
OPD（分子量108.14g/mol）0.004g
底物缓冲液 10ml
30%H2O2 15ul（临用前加）。
这是我的配方，请问你用的TMB显色效果好吗？OD值大约能达到多少，是自己配的吗？
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3楼2014-11-13 19:12:08
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我是钢镚

木虫 (正式写手)
★
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OPD的吸光波长在492nm， TMD的在450nm，楼主在测量时使用的波长都是用的450nm么
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4楼2015-01-03 19:42:53
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feiyue122

金虫 (正式写手)
★
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其实OPD的灵敏性更高的，所以检测OD值会偏高，但是由于它的光敏性比较大，所以没有TMB使用广泛
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5楼2015-01-20 10:49:35
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