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jinlinsheng

[交流] 怎样才能使峰更尖锐啊

我在液相上跑出来的峰比较宽胖,怎样才能使峰更尖锐啊
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xiaohezi7844

禁言 (知名作家)


xy4585618(金币+1,VIP+0):谢谢应助!
反相高效液相色谱中缓冲体系PH值的选择在反相高效液相色谱分析中,选择正确的缓冲液PH值,对可离解的化合物分析的重现性十分重要,不恰当的PH值可能导致不对称峰,宽峰,分裂峰或肩峰,而尖锐的,对称的峰是定量分析中获得低的检测限以,两次分析之间较低的相对标准偏差(RSD)和保留时间的高重现性的前提。我们将讨论在使用缓冲液时如何选择缓冲液的PH值,以及如何选择正确的缓冲体系。

什么时候需要缓冲溶液?
在反相液相色谱分析中,流动相的PH值一般在2.5-7之间,当被分析物在反相条件下可离解,或样品的PH值在2.5-7之外时,就需要缓冲液。在反相条件下可离解的化合物一般都有氨基和羧基,他们的Pka在1-11之间,选择正确的缓冲液PH值可保证可离解的官能团以一种形式存在,离子形式或中性化合物的形式。如果样品的PH值对柱子有伤害,则缓冲溶液可使其变温和从而减小其危害。

如何选择缓冲液PH值
在选择缓冲液PH值之前,应先了解被分析物的Pka,高于或低于Pka两个PH值单位的,有助于获得好的、尖锐的峰,从HH公式:PH=Pka+log([A-]/[A])得知,溶液PH值高于或低于Pka两个单位,化合物中99%以一种形式存在,而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰
2楼2008-05-11 09:53:45
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xiangjiang182

铜虫 (小有名气)


xy4585618(金币+1,VIP+0):谢谢!
出峰太晚也会使峰不尖锐。调整流动相极性使保留时间变短也会有效果。
3楼2008-05-11 11:21:11
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xy4585618

荣誉版主 (著名写手)

小木虫


xiaohezi7844(金币+1,VIP+0):说的不错
引用回帖:
Originally posted by jinlinsheng at 2008-5-11 09:42:
我在液相上跑出来的峰比较宽胖,怎样才能使峰更尖锐啊

除了楼上说得外再补充一点: 用梯度做出来的峰肯定比等度的峰形要好看!不信你试试!
是也罢,非也罢,是是非非争个啥。河东河西三十年,对的错啦,错的对拉!得也罢,失也罢,患得患失误年华。凡事该做尽管做,得了更好,失也没啥!
4楼2008-05-11 13:10:14
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aiyixiang

木虫 (小有名气)

加入适量的乙腈,峰会变尖。试试吧!
5楼2008-05-11 13:13:30
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agilent

金虫 (小有名气)

用洗脱能力更强的流动相试试
6楼2008-05-11 18:32:39
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dr.lixiang

金虫 (小有名气)

几个可能的方法


karl2100(金币+1,VIP+0):谢谢提供!
1 增加有机相的比例

2 变等度洗脱为梯度洗脱

3 增加流速

4 降低进样量

5 改用小粒径填料的柱子

6 添加适当的酸或盐

一般来说,简单的方法就这几个了。

呵呵,祝好运!
7楼2008-05-11 23:00:13
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