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wenzhuo188铜虫 (初入文坛)
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[交流]
细胞可能被支原体污染了
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我的细胞复苏第二代培养基一天就变黄了，细胞速度很慢，隔天长满，现在6天还没长满。细胞间有很小的空泡，有一些细胞死亡的尸体，pbs洗涤后就没了，常有一小整块漂起的细胞，MTT与正常时相比吸光度大好几倍，甚至过大测不出。请问下大神们，这有可能是支原体污染吗？如果是支原体污染需要如何处理，一些论坛里有人用环丙沙星，罗霉素等去除支原体，但是这样对细胞各种蛋白的表达有没有影响呢？ 1.jpg  2.jpg  3.jpg  4.jpg  5.jpg  6.jpg  7.jpg |
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支原体污染是基础研究和工业生产中一个很常见的问题，可能有高达87%的细胞系发生过支原体污染。。支原体是一种直径约为0.2~0.3um，无细胞壁的原核生物，可透过常见过滤膜（0.22-0.45 um），常规的无菌过滤方法不能将其去除，细胞培养常用的青霉素和链霉素也不能清除培养物中的支原体。支原体污染能耗尽营养物，促进代谢积累，导致pH改变，诱导或抑制细胞因子表达，并改变培养细胞的代谢、增殖特征及形态。支原体细胞体积小，种类繁多，培养物的混浊度以及对加富培养基的需求有限，此外，某些种类或菌株可能是细胞侵入性的，因此细胞被支原体污染一般难以察觉。由于支原体污染能影响几乎每一个细胞参数，所以很多研究都强调常规筛选研究细胞系的需要，以确保观察到的结果不被污染所损害。基于上述原因，开发一种针对支原体的快速可靠的检测方法颇具必要性。 我公司开发的支原体PCR检测试剂盒简化了测试过程，提高了检测效率，能在2-3小时内获得可靠的结果，是一种灵敏度高、特异性强、快速的检测细胞培养中支原体污染的方法。 本试剂盒特点：①特异性引物是针对高度保守的支原体16SrRNA序列设计的，可以用于检测非常广泛的支原体种类，不会受真核细胞或细菌DNA干扰。经本试剂盒测试的支原体菌株包括：猪鼻支原体（M.hyorhinis）、口腔支原体（M. orale）、肺炎支原体（M. pnemoniae）、精氨酸支原体（M.arginini）、发酵支原体（M. fermentans）、唾液支原体（M. salivarium）、无胆甾支原体（A.laidlawii），涵盖了所有常见的支原体污染种类；②采用降落PCR（Touchdown PCR）法扩增DNA片段，只需进行一次PCR反应，同时又比普通PCR灵敏度更高；③采用的阳性对照样品可扩增产生大小为643bp的DNA片段，使用的引物与支原体检测相同，用于判断PCR反应条件是否适合，从而鉴别假阴性结果；④本试剂盒包括了除模板外PCR反应所需的所有成分：DNA聚合酶，dNTPs，PCR反应缓冲液，引物和阳性对照样品，您只需要添加模板和水就可以进行PCR反应。 http://www.biomart.cn/infosupply/31432225.htm |
16楼2016-01-02 20:10:36
10楼2014-11-10 22:23:54
11楼2015-08-16 07:51:18
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13楼2015-08-17 10:43:27