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mofle

新虫 (初入文坛)

[求助] 请求专业解答 已有3人参与

在测定蛋白质羰基含量中，加入DNPH-HCl溶液后，黑暗环境下反应1h，没有红棕色沉淀产生。导致最后用分光光度计测吸光度时，数值很小或负值。想问一下问题在哪里。

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1楼 2014-11-06 19:11:20
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是水货

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mofle(zybpxy代发): 金币+1, 感谢专家应助，麻烦继续跟进此贴哦 2014-11-06 21:06:43
放置黑暗中每隔10min要漩涡一次，离心都是在4℃下进行的，如果室温是不是会有影响。你测羰基之前有没有测一下你的蛋白质含量呢？
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2楼2014-11-06 19:22:42
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mofle

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 是水货 at 2014-11-06 19:22:42
放置黑暗中每隔10min要漩涡一次，离心都是在4℃下进行的，如果室温是不是会有影响。你测羰基之前有没有测一下你的蛋白质含量呢？

是的，是在黑暗下15min旋摇一次，离心也是在4°C。样品蛋白质浓度测定为1mg/ml左右。之后还用过标准蛋白质溶液测过，也是没什么现象。

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3楼2014-11-06 19:42:44
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99503102

版主 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mofle(zybpxy代发): 金币+1, 感谢专家应助，麻烦继续跟进此贴哦 2014-11-06 21:06:33
是不是你的二硝基苯肼存放过久，见光分解了呢？或者在反应后的洗涤中，空白对照洗不干净，造成负值。如果上面的情况都不存在，那么也可能是蛋白质没有被羰基化，当然测不出来了→_→

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微信公众号：食安小屋
4楼2014-11-06 20:45:17
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是水货

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by mofle at 2014-11-06 19:42:44
是的，是在黑暗下15min旋摇一次，离心也是在4°C。样品蛋白质浓度测定为1mg/ml左右。之后还用过标准蛋白质溶液测过，也是没什么现象。
...

我觉得你先测蛋白然后在测羰基。试剂是不是也存放过久？其他的就不知道了。你看英文文献查找。
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5楼2014-11-06 21:34:18
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m919

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

楼上两位说的对。 二硝基苯肼存放久了的话 是不能使用的。还有就是测吸光度的时候，调零是用的什么呢？
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不是我不想去赚那8个BB，而是可选项找不到我的专业……
6楼2014-11-10 20:07:48
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