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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切片段怪异，请求各位大侠帮助~
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oaixlittle

金虫 (初入文坛)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-11-07 22:34:29
两个单酶切的片段大小不一样，应该检查检查酶切位点了，很可能是引入了另外的EcoRI位点了
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11楼2014-11-07 12:25:02
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catalya

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-11-07 22:34:37
点样量至少也要100ng吧，太少很难判断的。而且质粒一般都是两条带，都看不出你质粒的第二条带···而且你的着色试剂是不是弄多了，底色太亮了···
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12楼2014-11-07 14:48:44
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alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你测序了吗？？？
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修身、齐家、治国、平天下
13楼2014-11-07 23:29:36
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laobu66

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
14楼2014-11-08 08:53:36
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一城烟雨朦胧

新虫 (初入文坛)
你要的产物是多少bp，如果比较小，建议多切一点质粒，并且酶切过夜。上样检测时，增加上样量。可以先ecor1单切，多切一点，割胶回收后，再用bamh1进行酶切，最后上样检测。

[ 发自小木虫客户端 ]
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15楼2014-11-08 15:58:25
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天空2011

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议质粒浓度大一点，直接双酶切过夜

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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16楼2014-11-09 03:18:38
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393658000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laobu66(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-09 20:02:51
如果BamHI和EcoRI都是单酶切，那么恭喜您， 您的质粒是错误的；非常明显的两个单切的线性化带大小不一致。你所说的测序应该是说测过要切下来的序列；如果测序结果包含了两个酶切位点，那么这2个酶轻松切开，非常常见的2个酶，又不用担心甲基化什么的。如果有什么详细的私信我吧！
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17楼2014-11-09 13:06:51
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yangyufeng88

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
laobu66(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-09 20:02:59
两个可能的原因：1）质粒浓度太低，目标片段看不到；2）空载体。当然，上述判断基于所有试剂和操作都是正确的
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要适应生活，才能改变生活！
18楼2014-11-09 18:06:58
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geneyhh

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

一定要测序确定酶切目标序列，此外质粒骨架序列也应清楚！

[ 发自小木虫客户端 ]
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19楼2014-11-09 18:33:09
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