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lb1527

金虫 (小有名气)

[求助] 关于UPLC BEH Amide 柱子的问题 已有3人参与

我是做中药的,之前用T3 柱在UPLC 上做液相,峰都集中在30%的乙腈之前,客服人员跟我说让我换Amide的正相柱,可是效果也不好呀。有用过Amide柱子的高手吗?还有一个问题,正相柱的梯度应该怎么设置呢?是和反相柱相反吗?
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鲁莽小子

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道你用的什么流动相系统,你注意调整一下改性剂(如氨水,甲酸铵,乙酸铵)种类及pH值,这个影响也蛮大的,Amide柱子其实是采用的hillic的模式的,所以水是洗脱性强的溶剂,有机相是洗脱性较弱的溶剂 (也就是和T3是相反的),另外需要注意的是,Amide柱子要经常保持至少5%的极性流动相体系中或梯度流动相中(如5%水,5%甲醇或2%水+3%甲醇等),在流动相体系中至少保证含有40%的有机相(也就是水相不能超过60%),希望对你有帮助。
2楼2014-11-07 14:58:07
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月光晒谷

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我最近也在用这款柱子,如楼上所说,如果你要采用hilic,水相为强洗脱溶剂,一开始可以设置为高有机相,低水相的比例,逐渐转化为低有机相,高水相的比例(有机相不得低于50%,否则有可能转化为反相模式)。如果用盐,一般是甲酸铵,乙酸铵等在有机相中溶解性比较好的盐,防止析出。由于你用的是UPLC,所以溶剂效应会很明显,溶剂的选择一定要接近你的流动相初始比例(即不能是强洗脱溶剂),否则很容易使你的峰形差,分离度差。在hilic模式下,溶剂是很难解决的问题。如果分离度差,可以提高柱温,这款柱子很耐用,我的使用温度达到55度。waters公司有一本关于hilic的小册子,你可以找一本参考一下,很实用。
T3柱是C18柱吧,你用它在30%乙腈出峰,那么你用Amide反相模式应该也可以吧,多改改条件,这个柱子很耐用。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2014-11-07 15:29:32
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余再英520

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

正相柱,梯度洗脱中水的比例一定要小于有机相的,不然柱压升高很厉害
4楼2018-03-22 20:23:59
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