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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于荧光探针在细胞内检测!
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zhangxl1992

木虫 (正式写手)

[交流] 关于荧光探针在细胞内检测!

请问我要测荧光探针在细胞内的应用,24well板,细胞已培养好.

  想知道有什么需要注意的吗?
如:探针加入的浓度对细胞有什么影响?10uM可以吗?
    是否浓度越稀培养的时间需要越长?时间通常为多少?
我用了半个小时,荧光有些弱,是否探针还未进去多少?

另外:加入离子后,细胞内应有荧光,但却没有了.是否是激光照的原因.
      用激光照过的细胞还能继续用来加离子培养吗?
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1楼 2008-05-08 12:54:55
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花枝俏

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
lixiaoyi1981(金币+1,VIP+0):呵呵，谢谢
zhangxl1992(金币+2,VIP+0):谢谢,请问我用24well铺板照荧光可以做共聚焦吗?
细胞培养板应是专门用于荧光观测的，黑色，厚度是0.8的。有专门卖的；一般避光染色15分钟，而且也不能照的时间过长，因为荧光会淬灭。
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轻用其芒，动即有伤，是为凶器；深藏若拙，临机取决，是为利器。
6楼2008-05-10 11:51:58
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jennifertina

★ ★
zhangxl1992(金币+2,VIP+0):谢谢你迅速的回答!
用的什么荧光啊?我用过FITC的,被激光照的太久,会粹灭.最好能用抗粹灭剂配合使用.
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2008-05-08 15:57:50
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zhangxl1992

木虫 (正式写手)
什么样的抗猝灭剂呢,配在培养基里,还是缓冲的FBS里呢?
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3楼2008-05-09 01:18:09
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十比

木虫 (著名写手)
★ ★
zhangxl1992(金币+2,VIP+0):谢谢
24孔板那么厚能用激光共聚焦看吗？
你需要说明你具体的染料，至少要知道激发波长和接收波长。另外抗淬灭剂只能用在固定之后也就是说死细胞上吧？如果你要活体观察恐怕不能用，只能减少你的荧光照射时间和强度
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2008-05-09 13:16:31
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