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小雒饕餮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by smdsfy at 2014-11-21 09:21:13
不好意思,是“或者”而不是“活着”...

好吧好苦脑
11楼2014-11-24 12:39:51
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小雒饕餮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by smdsfy at 2014-11-21 09:21:13
不好意思,是“或者”而不是“活着”...

谢谢啦
12楼2014-11-24 12:42:22
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小雒饕餮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-11-20 10:59:59
应该重组不成功,菌落的质粒为目的片段原本的载体,可能在切胶回收的时候带入。所以菌落少,PCR阳性,质粒酶切不对。

p c r是假阳性的.酶切切不出来
13楼2014-11-24 12:50:23
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小雒饕餮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小冀- at 2014-11-02 14:34:47
酶切没带的话估计是没连上,你再试着连一下吧

好吧
14楼2014-11-24 12:53:48
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小雒饕餮

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by dongdekun at 2014-11-02 13:21:26
8成是质粒重组的问题。
从重组质粒开始,仔细检查每一步试验,限制性内切酶?平末端/粘性末端?质粒/目的基因摩尔比?抗生素种类/用量?
PCR假阳性很普遍,作为初筛可以,最终结果以酶切和测序为准。

嗯。谢
15楼2014-11-24 12:54:51
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cckk_2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
小雒饕餮(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-24 19:08:04
我觉得改一下条件比较好,16度水浴很难实现,室温差不多在21度,过夜的话水温也在20度左右,还不如选择21度连接一个小时,或者16度用PCR仪来替代。另外连接的时候载体和目的片段最好能根据片段大小确定实际比例,具体可以参考NEB公司有一个在线计算系统,根据公式来做。
科研炮灰
16楼2014-11-24 15:11:49
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Carpedime

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你的buffer是不是多次冻融过的?

[ 发自小木虫客户端 ]
17楼2014-11-24 15:27:54
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