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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 基因工程菌无法表达蛋白质，但是缺具有在卡那霉素中生长的能力
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zhhlovedu

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因工程菌无法表达蛋白质，但是缺具有在卡那霉素中生长的能力 已有4人参与

我之前保存的基因工程菌，可以分泌一种蛋白，用iptg诱导后可以有效表达，但是最近使用的时候发现同样可以在卡那霉素培养基中生长，但是使用iptg诱导后，蛋白不表达了。前后使用的培养和表达方法是一样的，一周前还可以正常的表达功能，求大神分析原因。着急~~
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1楼 2014-10-27 21:27:11
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提质粒，酶切或者pcr鉴定下，看看对不对,质粒没问题的话，就重新转化一次吧

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2楼2014-10-27 22:36:12
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benedictchau

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提质粒跑下胶，基因大小你知道吧 先确定质粒没问题  如果有问题的话就从原菌P基因然后重新往质粒上连接吧
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3楼2014-10-28 08:52:15
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bainaling

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR验证，或者重新转化，反正也还挺快的
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4楼2014-10-29 11:20:43
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

可能是保存不当或传代次数过多引起的，质粒考贝数大副下降；重新转化吧，同一个转化板子上的菌，每一个单菌的表达效果都不太一样的，有的相差还会很大。
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5楼2014-11-11 14:03:33
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