【答案】应助回帖
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bxzc123: 金币+30, 翻译EPI+1, ★★★很有帮助, 谢谢 2014-10-28 21:35:51
3.3. 生物活性化合物的分离与鉴定
生物活性化合物发现于细胞内，因此，根据上述在2.7中所述的生物活性指导的方法对菌丝体提取物进行分离和纯化。活性化合物能被HP-20树脂吸附。用石油醚对粗制品进一步分馏以帮助除去杂质，随后的二氯甲烷组分发现具有生物活性。先用硅胶柱层析、再用RP-18树脂进行制备型HPLC，最终分离得到纯的化合物。所分离化合物的鉴定是基于质量、红外线光谱和1H NMR光谱所得到的数据（图3-5）。在1H-NMR光谱中，在δ7.8和7.35处的信号被定为分别连于C-3和C-5上的质子。由于氮和OH基团很近，所以位于不饱和C-7上的质子出现在δ8.13。与其他吡啶环相连的芳香质子位于δ7.4－8.3之间。 O－甲基在δ3.9处呈单峰。通过将光谱数据与已发表的数据[19]比较以进行结构确认。根据该数据，将活性化合物被鉴定为青蓝霉素。（结构见）图6和它的化学性质见表5。根据所分离的化合物的最终产率（从8.5 L液体培养基中得到20毫克），往回推算出收获培养基中的滴度约为2.3毫克/升。为了简化提取方法以进行规模化纯化，尝试用等量乙酸乙酯对全培养基进行提取。发现青蓝霉素可以完全被乙酸乙酯萃取，因此可用该方法进行大规模批次提取。 |
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