【答案】应助回帖
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RXMCDM: 金币+1, 多谢应助！ 2014-10-26 12:24:15
bxzc123: 金币+80, 翻译EPI+1, ★★★很有帮助 2014-10-26 13:27:23
2.7. 生物活性追踪分离与纯化
8.5 L发酵肉汤经4000rpm离心30分钟以分离生物质。用甲醇萃取该400克生物质，过滤得到清晰溶剂层。（然后）进行三次后续提取。将萃取液合并并浓缩，使其不含溶剂。将干燥的粗提物悬浮于去离子水中，并通过填充有有DIAION HP-20树脂的玻璃柱，柱床体积为225毫升。用3升去离子水洗涤树脂两次，以除去未结合组分和介质颗粒。用水和具有不同极性的甲醇梯度进一步洗脱该树脂柱。合并具有生物活性组分并用旋转蒸发器蒸发直至干燥。先用石油醚再用二氯甲烷将甲醇提取物进一步分级。将活性二氯甲烷萃取物（500毫克）进行硅胶柱层析并用氯仿 - 甲醇梯度洗脱。检测各组分抗假丝酵母的生物活性 （琼脂扩散法）。合并活性组分，浓缩至干燥，得到半纯样品。通过制备型柱层析法对半纯样品（100毫克）在下述条件下进行进一步纯化：C-18 Eurospher柱（20毫米×250毫米，10微米）在等梯度模式下用乙腈和0.01M磷酸缓冲液（35:65）洗脱，洗脱流速为20ml /分钟，并用220nm波长紫外检测。将纯的活性组分（11 - 13分钟的洗脱液）进行减压蒸发，并用HP-20树脂脱盐，并用甲醇洗脱。洗脱的溶剂进行浓缩，得到纯的化合物（20毫克）。用1H NMR、MS和红外光谱分析鉴定所纯化的化合物。所有用于萃取的溶剂都是LR级，其中，HPLC等级的溶剂用于分析和制备型HPLC。 分析HPLC纯度用Water’s Empower 软件LC进行，采用Kromasil RP-18, 序列号: 39673 （150毫米×4.6 毫米），3.5微米柱。普通柱层析（CC）用硅胶（60 - 120＃），薄层色谱法在默克公司的硅胶60F 254（20×20厘米）铝板上进行。核磁共振光谱记录在DMSO-d6上（Bruker 300 MHz）。化学位移以ppm表示，并以四甲基硅烷作为内标。 用Bruker Daltonics系统进行质谱分析。红外光谱用Perkin Elmer PARAGON1000光谱仪记录在加压KBr压片上。 |
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