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纯哥2011

新虫 (小有名气)

[求助] 关于HPLC 重积分问题,有图有金币!懂的进!谢谢! 已有2人参与

目前,已经能将三种物质进行分离,如图1
问题1:这样的分离效果可以吗?这三个是标准样做的
问题2: 因为是要做定量分析,对图1进行了重积分,可是我搞来搞去只能曲线矫正到图2的样子,图2中峰的基线不是很平,行不行呢?
请问要不要校正呢?还是校正呢?
做HPLC也有很长时间了,以前做的都是简单的,校正后基线都比较平,现在改做含有多种化合物的东西了,试了好久才将这几种物质分离开来

关于HPLC 重积分问题,有图有金币!懂的进!谢谢!
图1.png


关于HPLC 重积分问题,有图有金币!懂的进!谢谢!-1
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
纯哥2011: 金币+50, ★★★很有帮助 2014-10-26 18:39:00
从峰型看,流动相种类选择不是最佳,可是试试使用缓冲盐之类的。
建议楼主使用缓冲盐,提高流速,降低流动相比例,让出峰时间后延,一则改善峰型,二则提高分离度,同时保证峰2和3之间的分离度更好。
归零
2楼2014-10-23 20:52:09
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纯哥2011

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by klicking at 2014-10-23 20:52:09
从峰型看,流动相种类选择不是最佳,可是试试使用缓冲盐之类的。
建议楼主使用缓冲盐,提高流速,降低流动相比例,让出峰时间后延,一则改善峰型,二则提高分离度,同时保证峰2和3之间的分离度更好。

1. 缓冲盐流动相举例呢?我用的C18柱,甲醇水体系不行,用的是乙腈水体系,各比例都试过了,流速是1ml/min 算高的了!另外!提高流速对分离度影响很小,关键还是看流动相
2.对重积分后的峰型怎么看?
3楼2014-10-23 22:33:59
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 纯哥2011 at 2014-10-23 22:33:59
1. 缓冲盐流动相举例呢?我用的C18柱,甲醇水体系不行,用的是乙腈水体系,各比例都试过了,流速是1ml/min 算高的了!另外!提高流速对分离度影响很小,关键还是看流动相
2.对重积分后的峰型怎么看?...

1:楼主的峰型有一些拖尾,可以使用含有三乙胺或醋酸铵的缓冲盐(根据物质结构来选择),控制pH在3.0左右,提高流速可以改善峰型,让峰尖锐一些(一定程度上);
2:重新积分与峰型无关,图1积分不合理,图2积分才是合理的。重新积分并未改善峰型!
归零
4楼2014-10-23 22:37:54
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纯哥2011

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by klicking at 2014-10-23 22:37:54
1:楼主的峰型有一些拖尾,可以使用含有三乙胺或醋酸铵的缓冲盐(根据物质结构来选择),控制pH在3.0左右,提高流速可以改善峰型,让峰尖锐一些(一定程度上);
2:重新积分与峰型无关,图1积分不合理,图2积分才 ...

1.由于样品液略偏碱性,我的流动相里已经加入了0.1%乙酸改善峰型的,已经减少拖尾了!2,3较尖锐,1峰呢?缝宽很宽的,这个比较有问题,但如果调节不了也没办法,试了好久了。
2.关于重积分,我认为是校正样品峰与基线间空隙,更准确定量计算的,重积分并不是为了改善峰型的
5楼2014-10-23 22:56:42
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 纯哥2011 at 2014-10-23 22:56:42
1.由于样品液略偏碱性,我的流动相里已经加入了0.1%乙酸改善峰型的,已经减少拖尾了!2,3较尖锐,1峰呢?缝宽很宽的,这个比较有问题,但如果调节不了也没办法,试了好久了。
2.关于重积分,我认为是校正样品峰与 ...

是的 你说的很有道理  峰1峰宽比较宽如果实在改善不了也没办法(当然换柱子是有可能改善的,比如现在的Waters CSH的色谱柱或者Atlantis T3的),关键是峰2和峰3之间峰谷落到了基线一下,这个比较麻烦。
2. 的确如你说的,如果为了准确定量,图2的处理方式已经可行了。
归零
6楼2014-10-23 23:01:31
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
后面两个峰之间那种情况是不能接受的,建议你照专家说的试试CSH和T3的柱子。
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
7楼2014-10-24 11:24:16
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纯哥2011

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by klicking at 2014-10-23 23:01:31
是的 你说的很有道理  峰1峰宽比较宽如果实在改善不了也没办法(当然换柱子是有可能改善的,比如现在的Waters CSH的色谱柱或者Atlantis T3的),关键是峰2和峰3之间峰谷落到了基线一下,这个比较麻烦。
2. 的确如 ...

用的agel ASB C18 的酸性柱,比安捷伦的效果好点,最近入手了一只bio-rad aminex 87H的糖柱,保护柱配下来花了2W+,是能完全分离,可走个样要50分钟,C18柱如图7min左右就搞定了,我是做活性的,做下来要哭死我了
8楼2014-10-24 19:51:33
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纯哥2011

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by archbishop at 2014-10-24 11:24:16
后面两个峰之间那种情况是不能接受的,建议你照专家说的试试CSH和T3的柱子。

是啊,两个峰分的很开,分界线直接戳破基线了,到底有多大影响?这两个柱子目前没有,不是专门做分析的,想购置还是比较困难的
9楼2014-10-24 19:54:31
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 纯哥2011 at 2014-10-24 19:54:31
是啊,两个峰分的很开,分界线直接戳破基线了,到底有多大影响?这两个柱子目前没有,不是专门做分析的,想购置还是比较困难的...

其实这种峰型对峰面积影响不大,只是比较难看,分离度计算达不到要求,尤其是柱效稍微一降低,两个峰就成一个峰了;
具体使用还要看楼主目的了~~~如果只是简单测个纯度,或者测三个物质的比例,在没有更好选择的情况下,也基本可以接受了。(个人意见,仅供参考)。
归零
10楼2014-10-24 20:22:49
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