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准博士

金虫 (正式写手)

[交流] 分子生物学问题

想克隆菌种代谢途径中的一种关键酶的基因,但是该菌株只确定了属,没确定种.请问:
1. 提取该基因的话,会不会不好提取?
2.是不是要提取全基因组进行克隆?
3.引物设计的话,只能是简并引物?简并引物克隆出来的基因序列怎么样?

补充：
现在已有的文献报道，微生物多糖——结冷胶的磷酸葡萄糖变位酶的基因克隆，已有人报道，但是，我的这个也是结冷胶类多糖，是另外一种多糖，菌跟人家的不一样，不知道可不可以用别人的方法

[ Last edited by 准博士 on 2008-5-3 at 13:13 ]
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1楼 2008-05-03 09:36:33
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hihoney

铁杆木虫 (职业作家)
什么都不知道，列出的方案没有可行性。
要研究代谢途径，必须先知道基本的遗传背景，然后构建突变体。
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2楼2008-05-03 09:55:48
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mark32280667806

★
准博士(金币+1,VIP+0):谢谢,大概知道怎么做了
建库，或者用兼并引物P
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3楼2008-05-03 19:34:43
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mark32280667806

★
准博士(金币+1,VIP+0):谢谢
可以多找几个类似的基因，通过同源比对分析，设计简并引物，扩出的条带，回收和类似基因大小差不多的，测序。
另外，也可以建库，通过特定的选择方法（根据基因的性质），来挑取重组子。
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4楼2008-05-04 00:51:23
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greenspringmi

银虫 (正式写手)
★
准博士(金币+1,VIP+0):xiexie
最好先把菌种确定，再进行下一步实验。
扩增基因，可以先设计兼并引物扩增保守序列，在保守序列的基础上两端的序列。
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5楼2008-05-04 07:40:24
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