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paulajjh

木虫 (著名写手)

[交流] pcr条带不亮的原因

我需要p出表达一个酶的基因,之前一直没有p出来,这两次可以p出来了.但是条带不是很亮.即pcr反应体系的目的DNA片断浓度不高,大家可以给我分析分析是什么原因吗>?
附注:能P出来,但是好像有非特异性扩增,除目的片断外,没有其他明显的片断,但是整个孔道背景都很量.(pcr弥散现象??? ]
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paulajjh

木虫 (著名写手)

求助

谢谢大家,希望大家可以给我一些解答
2楼2008-05-01 21:02:32
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖
增加一下循环次数试试。
路漫漫其修远兮,吾将上下而求索
3楼2008-05-02 15:12:38
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yangym1123

木虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
我觉得是PCR的特异性不高,可以试一下提高温度,降低镁离子浓度,或TouchdownPCR也是不错的(我试过)!
4楼2008-05-02 20:39:19
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mark32280667806

最简单,最有效的方法,提高温度5-10度,
5楼2008-05-03 19:37:23
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hfztim

至尊木虫 (正式写手)

可以用P出来的产物做为下一次PCR的模板,然后再提高1-2度退为温度。
6楼2008-05-03 20:11:25
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jerome711

银虫 (小有名气)

我也出现了这个问题,提高退火温度可以解决。
做懂得生活的人
7楼2008-05-03 22:30:30
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greenspringmi

银虫 (正式写手)

可以做个温度梯度PCR,确定最佳退火温度
8楼2008-05-04 07:43:05
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