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icecream0913

金虫 (小有名气)

[交流] 物质为何不出峰?

我从中药里分离出来的东西,点板后三个展开系统下都是一个点,用紫外扫描后只在203nm有吸收,但是进液相后不出峰,是什么原因啊?流动相用的不同比例的乙腈-水和乙腈-0.05%磷酸水,都不出峰,好郁闷啊………哪位虫子可以指点一下小妹吗?不尽感激!
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lassa

金虫 (小有名气)


karl2100(金币+1,VIP+0):谢谢指教!
我的经验:
1.浓度太低,紫外吸收弱,建议增大样品浓度。
2.如果是等度洗脱的话,如果不出峰,建议改用梯度洗脱。
203基本都是皂苷吧?梯度洗脱比较容易出峰。

[ Last edited by lassa on 2008-5-10 at 12:01 ]
9楼2008-05-10 12:00:38
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查看全部 13 个回答

apple1234

铁虫 (初入文坛)

会不会是浓度太低?或者出峰时间太靠后了?你进样走了多长时间?
2楼2008-05-01 10:56:00
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guozhiyong

银虫 (小有名气)


karl2100(金币+1,VIP+0):3Q
用203nm检测的话,应该是皂苷类的东西啦,这种东西经常会这样,你很有可能是浓度太低啦
3楼2008-05-01 13:42:06
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xy4585618

荣誉版主 (著名写手)

小木虫


karl2100(金币+1,VIP+0):谢谢补充!
不出峰的原因很多,除了楼上二位说得我再补充几点: 1、流动相中有机相浓度较低。解决方法,做液相时,有机相浓度先用90%的做,看出不出峰,如果出峰,就把有机相浓度降低,来提高分离度,一般情况下90%的有机相为流动相,样品应该在5分钟内出峰;如果不出峰,那就要根据样品的性质来加酸或碱,调流动相的PH值!
2、色谱柱的原因:检查一下色谱柱是不是有问题(测一下柱效,看看理论塔板数、峰形及分离度),看色谱柱是不是什么特殊的色谱柱,比如说是氨基柱、氢基柱、手性柱等。3、就是仪器的原因:检查色谱柱两端是否接好;看灯的能量是否足够;水和有机溶剂瓶中的滤头是否堵塞(这个原因的可能性较大,如果滤头堵塞,会导致进入色谱柱的有机相比例发生变化,最后导致样品无峰。解决办法就是滤头用有机溶剂超声)
是也罢,非也罢,是是非非争个啥。河东河西三十年,对的错啦,错的对拉!得也罢,失也罢,患得患失误年华。凡事该做尽管做,得了更好,失也没啥!
4楼2008-05-01 14:10:50
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