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青青草allan

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 反应链 at 2014-10-13 23:18:49
质粒验证,还是要靠酶切。

TA克隆的话,两组酶切:

(1)HindIII单酶切;
(2)salI、EcoRI双酶切。

阳性克隆:(1)约5Kb;(2)约3kb,跑长时间,胶浓度大些,载体与片段条带也可区分。

好的,试一下。谢谢!
爱出者爱返,福往者福来
11楼2014-10-14 22:34:25
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
青青草allan(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-15 15:04:38
引用回帖:
7楼: Originally posted by 青青草allan at 2014-10-14 22:28:42
没有做对照。因为之前短片段菌液检测时也没做过对照,很容易就出来了...

菌液PCR经常会有假阳性,另外因为体系中成分复杂、影响因素较多,经常也会出现扩增无结果的情况,所以建议以后做菌液PCR还是加上对照好些。
12楼2014-10-14 23:12:01
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jiaowenqiang

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
青青草allan(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-15 15:04:47
青青草allan: 金币+1, 有帮助 2014-10-16 21:55:06
两种方法:
1、找一个构建好的鉴定为阳性的质粒作为对照跑电泳;
2、酶切鉴定
13楼2014-10-15 09:39:10
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zhen0209

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by 青青草allan at 2014-10-14 22:28:42
没有做对照。因为之前短片段菌液检测时也没做过对照,很容易就出来了...

一般情況下沒有對照也沒關係,但是遇到問題時候,必須做對照組才能很快找出你的問題在哪裡
14楼2014-10-16 07:54:38
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青青草allan

银虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by zhen0209 at 2014-10-16 07:54:38
一般情況下沒有對照也沒關係,但是遇到問題時候,必須做對照組才能很快找出你的問題在哪裡...

嗯,好的,谢谢了!
爱出者爱返,福往者福来
15楼2014-10-16 21:54:59
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hmily890404

新虫 (小有名气)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-29 20:50:50
菌液PCR的体系实在是太复杂了。。我通常鉴定从来都不会用菌液PCR,出来的结果阴性的阳性的感觉都不大可靠。还是把质粒提出来再鉴定最靠谱了。也就是多一步提质粒,但是结果更加可靠!何乐而不为~~
16楼2014-11-29 20:20:57
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hmily890404

新虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 青青草allan at 2014-10-16 21:54:59
嗯,好的,谢谢了!...

同是昆虫学的!
17楼2014-11-29 20:21:27
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