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青青草allan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 反应链 at 2014-10-13 23:18:49
质粒验证，还是要靠酶切。

TA克隆的话，两组酶切：

（1）HindIII单酶切；
（2）salI、EcoRI双酶切。

阳性克隆：（1）约5Kb；（2）约3kb，跑长时间，胶浓度大些，载体与片段条带也可区分。

好的，试一下。谢谢！
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爱出者爱返，福往者福来
11楼2014-10-14 22:34:25
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
青青草allan(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-15 15:04:38
引用回帖:
7楼: Originally posted by 青青草allan at 2014-10-14 22:28:42
没有做对照。因为之前短片段菌液检测时也没做过对照，很容易就出来了...

菌液PCR经常会有假阳性，另外因为体系中成分复杂、影响因素较多，经常也会出现扩增无结果的情况，所以建议以后做菌液PCR还是加上对照好些。
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12楼2014-10-14 23:12:01
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jiaowenqiang

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
青青草allan(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-15 15:04:47
青青草allan: 金币+1, ★有帮助 2014-10-16 21:55:06
两种方法：
1、找一个构建好的鉴定为阳性的质粒作为对照跑电泳；
2、酶切鉴定
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13楼2014-10-15 09:39:10
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zhen0209

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
7楼: Originally posted by 青青草allan at 2014-10-14 22:28:42
没有做对照。因为之前短片段菌液检测时也没做过对照，很容易就出来了...

一般情況下沒有對照也沒關係，但是遇到問題時候，必須做對照組才能很快找出你的問題在哪裡
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14楼2014-10-16 07:54:38
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青青草allan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by zhen0209 at 2014-10-16 07:54:38
一般情況下沒有對照也沒關係，但是遇到問題時候，必須做對照組才能很快找出你的問題在哪裡...

嗯，好的，谢谢了！
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爱出者爱返，福往者福来
15楼2014-10-16 21:54:59
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hmily890404

新虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-29 20:50:50
菌液PCR的体系实在是太复杂了。。我通常鉴定从来都不会用菌液PCR，出来的结果阴性的阳性的感觉都不大可靠。还是把质粒提出来再鉴定最靠谱了。也就是多一步提质粒，但是结果更加可靠！何乐而不为~~
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16楼2014-11-29 20:20:57
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hmily890404

新虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 青青草allan at 2014-10-16 21:54:59
嗯，好的，谢谢了！...

同是昆虫学的！
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17楼2014-11-29 20:21:27
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