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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 无菌烟草种子的消毒方法，有经验的看过来，急！
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sansejin20

铜虫 (初入文坛)

[求助] 无菌烟草种子的消毒方法，有经验的看过来，急！ 已有3人参与

本人准备培养无菌烟草苗，刚买的本氏烟草种子，种子非常小，用什么试剂对他消毒呢？具体的试剂的消毒时间，而且又不影响其发芽率。还有用的MS培养基需要加激素吗？希望做过的人给一些建议和意见。
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食品研究生，何去何从
1楼 2014-10-11 15:00:59
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honghu185

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-10-11 19:04:59
sansejin20: 金币+2 2014-10-12 10:21:10
最简单的方法，可以种84消毒液10~30%的稀释液浸泡30min，然后在用无菌水清洗3~5次，这一步在超净台内进行。然后用75%酒精+吐温201滴，试验台内消毒20~30s，要求消毒过程不断摇动消毒瓶（三角瓶就可以），结束后迅速转入0.1%的升汞溶液中6~8min，无菌水清洗3~5次，用无菌滤纸吸干种子表明水分，就可以接种了。初代培养一般不需要激素。继代培养中可以加入细胞分裂素，或者细胞分裂素和生长素，具体得看植株的长势。
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2楼2014-10-11 15:46:50
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sansejin20

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by honghu185 at 2014-10-11 15:46:50
最简单的方法，可以种84消毒液10~30%的稀释液浸泡30min，然后在用无菌水清洗3~5次，这一步在超净台内进行。然后用75%酒精+吐温201滴，试验台内消毒20~30s，要求消毒过程不断摇动消毒瓶（三角瓶就可以），结束后迅速 ...

我查的资料说升汞会影响发芽率，有说用次氯酸钠的，还有说用双氧水的，还有说配合75%酒精的，具体什么浓度和浸泡时间我查不到，就是想请问下做过的前辈，你的这种方法试过吗？
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食品研究生，何去何从
3楼2014-10-12 10:11:31
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honghu185

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sansejin20 at 2014-10-12 10:11:31
我查的资料说升汞会影响发芽率，有说用次氯酸钠的，还有说用双氧水的，还有说配合75%酒精的，具体什么浓度和浸泡时间我查不到，就是想请问下做过的前辈，你的这种方法试过吗？...

先确定一下现有种子的发芽率，如果种子合格，升汞对种子的发芽影响很少。用升汞主要是后期要多洗几次尽可能洗干净。如果建无性系，一般不用考虑对发芽的影响。如果楼主举棋不定可以将看到的几个程序做一个对比试验就行，发芽主要的影响因素是品种、其次是温度和湿度。您可以再参考一些文献。
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4楼2014-10-12 14:37:35
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youlicaca

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sansejin20: 金币+2, ★有帮助, thank you 2014-10-12 16:05:22
次氯酸钠 is the cheaper and easier way. Can be sterilized at 0.5% for 5-10min,  rinsed with sterile water 3x, soaked in ddw at 4C for O/N or 2days, then germinate on MS-agar medium or similar ones. 24c/20c day/night temperature.

Good luck on this easy growing plant.
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5楼2014-10-12 15:08:41
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sansejin20

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by youlicaca at 2014-10-12 15:08:41
次氯酸钠 is the cheaper and easier way. Can be sterilized at 0.5% for 5-10min,  rinsed with sterile water 3x, soaked in ddw at 4C for O/N or 2days, then germinate on MS-agar medium or similar ones. 2 ...

What is the meaning"O/N"?
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食品研究生，何去何从
6楼2014-10-12 16:10:06
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Cynthiaxin

金虫 (小有名气)
楼主，请问这个种子你们是在哪买的？
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7楼2014-12-14 18:59:43
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superxuran

新虫 (初入文坛)
您好！请问您在哪里购买到本氏烟草的种子，我也是做实验需要，希望您帮忙提供一下购买方式，或者我能找你分享一些，都不胜感激。
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8楼2017-04-06 14:38:36
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6_pengfei

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sansejin20 at 2014-10-12 16:10:06
What is the meaning"O/N"?...

one night,假洋鬼子
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努力精修
9楼2017-04-06 15:19:14
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6_pengfei

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我本氏烟种子消毒用次氯酸钠，具体为先将种子用滴加一滴吐温的蒸馏水充分涡旋清洗后，水洗几次再用75%酒精浸泡30s，再用30%次氯酸钠（买的次氯酸钠当100%）浸泡10min，无菌水洗4-5次，再用无菌水浸泡10min，吸干水，接到无激素的1/2MS上。
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努力精修
10楼2017-04-06 15:24:43
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