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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求问：关于Takara公司T载体的使用
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)

[交流] 求问：关于Takara公司T载体的使用

转化后长的全是白斑，然后挑取的单克隆却无法在含抗生素的液体培养基中生长。
是什么原因？

大家如何有什么技术心得，即使与此发问无关，也请晒一晒。
谢谢！！
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赠人玫瑰，手有余香。
1楼 2008-04-26 11:31:28
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puma2003

铁杆木虫 (著名写手)
你酶切或pcr验证一下单克隆是否已经重组
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2楼2008-04-26 11:37:07
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by puma2003 at 2008-4-26 11:37:
你酶切或pcr验证一下单克隆是否已经重组

能否说得再清楚一些？
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赠人玫瑰，手有余香。
3楼2008-04-26 11:38:57
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傻子

木虫 (正式写手)
用原扩增PCR片段的引物，以长的斑为模板进行菌液PCR鉴定
看看T载体的图谱，选两个酶进行双酶切鉴定
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1984年中国制造,长173CM,净重64kg,采用人工智能，国家免检优质产品。
4楼2008-04-26 12:46:45
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isabelzz

木虫 (小有名气)
T载体连接有的时候会有假阳性出现
所以楼上说的很对  要用PCR的方法  提取你的白色菌落的质粒  用之前你的引物来扩增  然后电泳看看条带是否和你的重组条带大小一致
但是需要注意的是PCR的假阳性也比较大 所以建议你还是用充足的质粒来做个双酶切鉴定
祝你好运
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5楼2008-04-26 19:20:14
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胡笳桃子

新虫 (小有名气)
那么，是使用M13为引物比较合适还是各自的引物合适呢？
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赠人玫瑰，手有余香。
6楼2008-04-29 10:03:16
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