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longxiange520金虫 (小有名气)
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求助：肿瘤细胞怎么培养？
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要培养肿瘤细胞了，可是以前从来没有培养过，请问下以前培养过肿瘤细胞的大侠，培养中应该注意些什么事项呢？能否给我指点下经常出现的一些问题？ 谢谢啦！ [ Last edited by 350784478 on 2009-7-12 at 09:04 ] |
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5楼2008-04-26 14:30:05
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http://zhidao.baidu.com/topic?ct ... 8%B0%FB%C5%E0%D1%F8 哪个是百度知道的介绍，可以随便看看 但其实我觉得没那么严重的 有些叫做细胞培养，细胞培养试验指南之类的书，你可以去图书馆或者超星看看 随便来说几点基本的吧： 1.肿瘤细胞是最好样的细胞，不必害怕，去atcc网页，或者你参考的相关文献，查一查细胞培养条件，比如说基础培养液类型，CO2浓度，多少血清浓度，需要什么特别的添加剂，比如说非必须氨基酸之类 2.准备实验器材，细胞培养板，培养瓶，培养液，血清诸如此类。血清最好问问有经验的人，因为不同的细胞有不同要求，当然，如果资金充裕，用GIBCO或者Hyclone德基本上不会出问题的。贴壁细胞需要配PBS和0.25%胰酶用于消化传代，也可以配点双抗 3.注意一切无菌操作。所有溶液要灭菌，不能高压的就过滤。操作之前工作台紫外灭菌30分钟，所需东西和手进入超净台之前要喷酒精，操作是仪器和手尽量不要从敞开的培养瓶培养板上方经过，敞开盖子的操作不能离开超净台区域，少说话少打喷嚏。 4.冻存的细胞在大约30-37度水浴溶解，大约1500转离心5分钟，弃取上清，加入培养液重选，转入培养瓶。一个25cm2培养瓶加大约4ml培养液。贴壁以后再换新培养液，多数细胞过夜就可以贴壁了。然后就那么养啊养，等到长到80%-90%，快长满的时候，就要传代，先倒掉原来的培养基，用PBS洗干净残留的，如果细胞属于难消化的，可以改用0.02%EDTA，但要吸干净。然后加胰酶，放37度，初次养要多观察，等到细胞变圆，轻拍能大多数拍下来，就加入一点新鲜培养液，终止消化，吹洗一下瓶底，让细胞充分脱落，一般的细胞剩下1/5到1/4，其余的扔掉，然后继续养就可以了。养细胞一般不要加双抗，做实验时候才加。 [ Last edited by superwheat on 2008-4-27 at 04:21 ] |
6楼2008-04-27 04:11:02
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