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woodcarter

银虫 (正式写手)

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[交流] 急求饲料中睾酮（或雄激素）含量的测定（所用金币作谢）继续求助

高金急求饲料中睾酮（或雄激素）含量的测定，在线等待，谢谢！有解答者再加上本人所用金币，急用，谢谢！

[ Last edited by woodcarter on 2008-4-26 at 10:56 ]

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1楼 2008-04-25 09:22:51

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strangerwhx

铜虫 (小有名气)

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专业: 药剂学

★ ★ ★ ★ ★
woodcarter(金币+5,VIP+0):多谢！

这有个尿中睾酮的含量测定方法，你参考下吧，应该差不多，希望有所帮助
1.　Eu3+标记抗体制备　参照Eu3+标记试剂盒说明书
操作。取猴抗羊抗体0. 4mg,用标记缓冲液稀释至200μl与
0. 1mg的Eu3+-N2-[p-异氰酸-苄基]-二乙烯三胺四
乙酸(Eu3+-DTTA)充分混匀, 4℃反应24h。反应液用
SephadexG-50柱(1×40cm)层析,A280监测收集蛋白峰,合
并峰管,测定蛋白含量,同时用Eu3+标准液测定合并峰的
Eu3+浓度。经计算得出本试验的标记率(Eu3+mol/IgG mol)
为7. 0,蛋白回收率为82. 9%。
2. 　固相反应板制备　将包被抗原睾酮-BSA用包被缓
冲液稀释至5μg/m,l 96孔微孔板各孔加100μ,l 4℃放置过
夜。弃去包被液,冲洗三次,加200μl含3g/L BSA的上述缓
冲液封闭, 4℃放置过夜。弃去封闭液,真空抽干,板条密封
后置-20℃冷冻保存。
3.　标准品的制备　用含0. 2% BSA, 0. 1% NaN3,
50mmol/L pH7. 8 Tris-HCl缓冲液将睾酮标准品配制成0、
1. 0、3. 0、10. 0、30. 0、100. 0nmol/L系列标准液,每瓶1ml分
装冻干, -20℃干燥保存。
4.　TrFIA测定方法　采用竞争法。先在包被睾酮的96
孔微孔板上,每孔依次加入50μl睾酮标准品或待测尿液,
100μl以反应缓冲液适当比例稀释的羊抗人睾酮多克隆抗
体, 25℃振荡孵育30min后,洗涤4次。加入200μl以反应缓
冲液稀释的Eu3+标记的猴抗羊抗体, 25℃振荡孵育30min
后,洗涤6次。再加增强液200μ,l 25℃振荡反应5min,荧光
检测。全部过程均在AutoDELFIA1235上自动完成,软件作适
当修改。
5.　DPC RIA测尿总睾酮方法　严格按照试剂盒说明
书进行。尿液酸处理方法为:取1ml尿液,加200μlHCl
(当量浓度为12N),置于沸水中煮沸15m in。取经处理后
的尿液10μ,l加240μl零标准液稀释,后按常规方法进行检
测。
6.　统计学处理　TrFIA法测尿总睾酮典型标准曲线由
origin7. 5软件处理,两组均数比较采用t检验。