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dachun263031
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【答案】应助回帖
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实验室小白鼠(答非所问代发): 金币+5 2014-10-09 17:12:17
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水稻种子中蛋白质和淀粉含量的测定 Ⅰ 大米蛋白质含量的测定——考马斯亮兰G—250法 一、原理 考马斯亮G—250是一种染料，在游离状态下呈红色，在465nm波长处有最大光吸收。它能与蛋白质稳定结合，结合蛋白质后变为青色，在595nm处有最大吸收，在一定蛋白质浓度范围内（0～1000μg/ml），蛋白质—色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。该法反应迅速，蛋白质与考马斯亮兰G—250的结合反应能在2分钟内达到平衡。结合物在室温下1小时内保持稳定，反应非常灵敏，可测出微克级蛋白质含量，是最近新发展起来的一种较理想的蛋白质定量法。 二、实验材料、仪器及试剂 1．仪器： 721型分光光度计 离心机 50ml容量瓶 10ml刻度试管研钵 量筒 移液管 2．试剂： （1）牛血清白蛋白（1000μg/ml）：称取100.00mg牛血清白蛋白，溶于100ml蒸馏水中，配制成标准蛋白质溶液。 （2）考马斯亮兰G-250溶液：称取100ml考马斯亮兰G—250，溶于50ml 90%乙醇中，加入85%（W/V）的磷酸100ml，最后用蒸馏水定容到1000ml，过滤，常温下可放置1个月。 （3）0.1mol/LnaOH：称取4g氢氧化纳，用蒸馏水溶解，并定容至1000ml。 3．材料：大米粉 三、实验方法 1．标准曲线的制作： 取6只10ml刻度试管，编号，按下表数据配制牛血清白蛋白标准溶液。准确吸取上述各管溶液0.1ml，对应放于另外6支10ml刻度试管中，加入5ml考马斯亮兰G-250溶液，盖塞，将试管中溶液给向倒转混合，放置2分钟后，用10mm光径的比色杯在595nm波长下比色。以光密度值为纵坐标，以蛋白质浓度值为横坐标，制作出标准曲线。 2．样品中蛋白质提取： （1）准确称取稻米粉0.5克，放入研钵中，加2ml0.1mol/L NaOH，研磨成匀浆，转入到10ml离心管中，再用6ml 0.1mol/ L NaOH分三次洗涤研钵，洗液一并转入10ml离心管中，用玻棒搅拌，放置30分钟，放置过程间断搅动数次。3500rpm离心15分钟，上清液转入50ml容量瓶中，用蒸馏水定容到刻度，摇匀，得碱溶性蛋白。 （2）将上述沉淀用70%乙醇重复提取，操作步骤同上，得醇溶性蛋白。 3．测定： 吸取提取液0.1ml，放入10ml具塞刻度试管中，加5ml考马斯亮兰G-250试剂，混匀，放置2分钟，用10mm光径的比色杯在595nm波长下比色（比色空白用0.1ml蒸馏水代替提取液与5ml考马斯亮兰G-250试剂混合），记录OD值。然后根据所测OD595nm在标准曲线上查出所对应的蛋白质浓度（C）。 四、结果计算： 五、注意事项： （1）由于此方法十分灵敏，因此，所用器皿必须清洗干净，取样必须准确，否则会造成很大的误差。 （2）定容时蒸馏水要沿着管壁缓慢加入，以免产生大量气泡，造成定容不准确，实验也会出现误差。 （3）谷物种子蛋白质主要是谷蛋白和醇溶蛋白，因此，稻米粉蛋白含量应为碱溶性谷蛋白和醇溶性蛋白含量之和。 Ⅱ 旋光法测定大米总淀粉 一、原理 淀粉因含有不对称碳原子，故具有旋光性。在加热条件下，淀粉可分散于稀盐酸溶液中，用磷钨酸沉淀蛋白质等其他旋光物质后，将溶液定容到一定体积。利用旋光仪测定出淀粉溶液的旋光偏振角。根据不同作物淀粉的比旋光度 具体链接：http://www.bbioo.com/experiment/15-1523-1.html |
2楼2014-09-26 21:51:01