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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 学术帮助 » 痘病毒重组反筛 急急急!!!
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张晓彩

新虫 (初入文坛)

[求助] 痘病毒重组反筛 急急急!!!

请教各位一个问题，我最近在做痘病毒的重组，已经将EGFP插入到左右同源臂之间了，现在在进行反筛，就是将我的带有左右同源臂的目的基因替换掉EGFP，但是看荧光的时候很多不带光的，然后就扩大培养了一代PCR鉴定，发现条带大小符合最原始的未插EGFP的野毒，同时也鉴定了质粒和重组好的亲本毒都没有污染，是什么原因呢，请大侠指点迷津啊
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1楼 2014-09-25 10:38:49
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古水世承

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我也是学生物的，你在看荧光的时候，本身就有很多不带光的，pcr之后，带荧光的肯定会更少，因为会把它稀释。你可以试试先进行反筛，再做PCR

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-09-27 07:53:26
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张晓彩

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 古水世承 at 2014-09-27 07:53:26
我也是学生物的，你在看荧光的时候，本身就有很多不带光的，pcr之后，带荧光的肯定会更少，因为会把它稀释。你可以试试先进行反筛，再做PCR

我的重组病毒是重组上EGFP的，应该有光，没光的不应该是重组上我的目的基因的吗  但是pcr之后不是呢  为什么呢
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3楼2014-09-30 10:28:20
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