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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » HPLC分离
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635450245

银虫 (正式写手)

[求助] HPLC分离 已有3人参与

有哪位虫子知道HPLC色谱分离适用梯度？
其实就是结合自身经验总结出 什么样的蛋白/多肽适用什么样的梯度分离？
我们现在大多用的是1~69%的分离梯度。
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幸福就好！！！
1楼 2014-09-23 13:11:11
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shale1983

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
就你的这条肽，挺亲水的，剃度:5-35%，应该差不多了。

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-09-23 13:53:56
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635450245

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shale1983 at 2014-09-23 13:53:56
就你的这条肽，挺亲水的，剃度:5-35%，应该差不多了。

不是 我需要的是经验..........多肽..........梯度分离
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幸福就好！！！
3楼2014-09-23 14:36:53
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fannieliu

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我这里给你提供一个截图，我们公司可专门定制合成多肽，这个是HPLC分析图谱，图贴不上去啊
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4楼2014-09-23 14:47:41
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fannieliu

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
★ ★
635450245: 金币+2 2014-09-23 16:12:14
引用回帖:
3楼: Originally posted by 635450245 at 2014-09-23 14:36:53
不是 我需要的是经验..........多肽..........梯度分离...

Column:        Kromasil 100-5C18, 4.6*250mm
Solvent A        A: 0.1% Trifluoroacetic Acid in 100% Acetonitrile
Solvent B        B: 0.1% Trifluoroacetic Acid in 100% Water
Gradient:                A        B
        0.0min        15%        85%
        25.0min        40%        60%
        25.1min        100%        0%
        30.0min        Stop
Volume:        20μl
Wavelength:        220nm
Flow rate:        1.0ml/min
以上一般是我们多肽HPLC 梯度分离的。。。。。
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5楼2014-09-23 14:51:25
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合成多肽

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
635450245: 金币+3, ★★★很有帮助 2014-09-25 18:58:18
请问这条多肽你做过分析嘛？
你可以先测一下分析时间，然后根据分析时间设置制备梯度。一般保证制备时在20分钟之后出峰是最理想的时间，因为这样既可以保证分离效率，又可以节约时间。

一般分离梯度可以按照分析时间t来设置。大致公式如下:2t加减5
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6楼2014-09-25 15:17:17
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635450245

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 合成多肽 at 2014-09-25 15:17:17
请问这条多肽你做过分析嘛？
你可以先测一下分析时间，然后根据分析时间设置制备梯度。一般保证制备时在20分钟之后出峰是最理想的时间，因为这样既可以保证分离效率，又可以节约时间。

一般分离梯度可以按照分析 ...

不好意思，我是初学者，您能把公式再具体讲一下吗？
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幸福就好！！！
7楼2014-09-25 19:01:44
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635450245

银虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 合成多肽 at 2014-09-25 15:17:17
请问这条多肽你做过分析嘛？
你可以先测一下分析时间，然后根据分析时间设置制备梯度。一般保证制备时在20分钟之后出峰是最理想的时间，因为这样既可以保证分离效率，又可以节约时间。

一般分离梯度可以按照分析 ...

二十分钟之后还是二十分钟
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8楼2014-09-25 19:03:51
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合成多肽

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 635450245 at 2014-09-25 19:03:51
二十分钟之后还是二十分钟...

二十到二十五之间出峰最理想
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9楼2014-09-28 10:44:29
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合成多肽

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 635450245 at 2014-09-25 19:01:44
不好意思，我是初学者，您能把公式再具体讲一下吗？...

比方说分析时出峰时间是12分钟。
制备(C18柱）时具体梯度可为：
0min        5%
5min        19%
45min       29%
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635450245
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10楼2014-09-28 10:48:11
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