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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xkzspace at 2014-09-23 12:43:57
phusion酶里面有5xGC buffer，还是扩不出啊...

是不是你的引物Tm太高
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11楼2014-09-23 17:28:18
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xujian568

至尊木虫 (著名写手)

Count XU
引用回帖:
9楼: Originally posted by xujian568 at 2014-09-23 14:57:02
Just try 2 step
Tm of primer>60
95-->(95, 68)*35-->68-->4

Anyway, just try.
------->
kod+neo---->40''
kid FX/taq/pfu---->1'20''
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活着就要让人感受到你的存在。
12楼2014-09-25 14:37:17
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rainguy

木虫 (著名写手)
找公司合成

[ 发自小木虫客户端 ]
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13楼2014-09-25 15:12:11
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meizizhu

新虫 (初入文坛)
GC含量在47%左右，不算特别高。
GC含量高，想扩增成功，先考虑用>58℃以上的退火温度扩增。相应的，引物设计时就要提高引物的Tm值。
如果高温扩增不够好，可以让PCR体系内含1%或2%的DMSO试试（DMSO加入PCR体系后，终浓度为1%或2%）。
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14楼2014-09-30 16:16:00
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hhl1230

新虫 (小有名气)
请问楼主现在扩得怎么样了？我也遇到GC含量高的问题，不过目测我的比你的高多了，如果扩出来了，能交流一下吗？
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15楼2014-10-07 12:50:29
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