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jingleyj

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助蛋白表达

请问大家有没有好用的原核生物表达蛋白的protocol?能否共享一下?
要是形成包涵体了,煮沸之后可以打破吗?一般煮多久比较好?细菌是不是一定要超声破碎?IPTG浓度一般用多少?诱导时间一般是多少?

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-16 at 21:04 ]
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weiwei1

木虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
IPTG浓度,诱导时间,都是蛋白表达需要摸索的条件啊;不同蛋白,这些都是不一样的。包涵体据说用超声破碎可以打破,不知详情。
2楼2008-04-23 12:48:09
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张浥尘361

新虫 (初入文坛)


reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖
要自己摸索条件,形成包涵体可以试一试减少IPTG的浓度,降低诱导的温度
3楼2008-04-23 18:48:40
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)


reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖
不用超声波也能检测出来.
4楼2008-04-23 19:55:41
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xiukuncui

木虫 (正式写手)


reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖
IPTG 一般千分之一。诱导时间蛋白之间不同,一般做一个时间梯度,跑个PAGE就ok了
5楼2008-04-24 19:06:58
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雨辰853

铜虫 (小有名气)

我最近也在提蛋白,IPTG浓度,诱导时间都是蛋白小试摸索出来的,各种蛋白条件不一样的。但有些却只能形成包涵体,无论条件怎样优化,就只能用提包涵体的方法了。
6楼2008-07-14 20:37:37
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biogefart

木虫 (著名写手)

包涵体不可能打破的!!!

只能用尿素或者盐酸胍溶解。
闹太套
7楼2008-07-14 20:47:47
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