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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助蛋白表达
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jingleyj

新虫 (初入文坛)

[交流] 求助蛋白表达

请问大家有没有好用的原核生物表达蛋白的protocol？能否共享一下？
要是形成包涵体了，煮沸之后可以打破吗？一般煮多久比较好？细菌是不是一定要超声破碎？IPTG浓度一般用多少？诱导时间一般是多少？

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-16 at 21:04 ]
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1楼 2008-04-22 18:48:25
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weiwei1

木虫 (小有名气)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
IPTG浓度，诱导时间，都是蛋白表达需要摸索的条件啊；不同蛋白，这些都是不一样的。包涵体据说用超声破碎可以打破，不知详情。
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2楼2008-04-23 12:48:09
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张浥尘361

新虫 (初入文坛)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖
要自己摸索条件，形成包涵体可以试一试减少IPTG的浓度，降低诱导的温度
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3楼2008-04-23 18:48:40
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖
不用超声波也能检测出来．
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4楼2008-04-23 19:55:41
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xiukuncui

木虫 (正式写手)
★
reasonspare(金币+1,VIP+0):积极交流奖
IPTG 一般千分之一。诱导时间蛋白之间不同，一般做一个时间梯度，跑个PAGE就ok了
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5楼2008-04-24 19:06:58
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雨辰853

铜虫 (小有名气)
我最近也在提蛋白，IPTG浓度，诱导时间都是蛋白小试摸索出来的，各种蛋白条件不一样的。但有些却只能形成包涵体，无论条件怎样优化，就只能用提包涵体的方法了。
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6楼2008-07-14 20:37:37
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biogefart

木虫 (著名写手)

包涵体不可能打破的！！！

只能用尿素或者盐酸胍溶解。
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闹太套
7楼2008-07-14 20:47:47
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