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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC检测雌激素E1, E2, E3
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lilianli1986

新虫 (初入文坛)

[求助] HPLC检测雌激素E1, E2, E3 已有1人参与

请教版上的大牛们，最近在用HPLC-DAD检测雌激素E1, E2, E3。雌激素溶解在水中制成混合标样。在做标准曲线时发现如果连续进样，不能得到可重复的结果：在进第一个样品时出峰(E1出现在21min, E2出现在19min, E3出现在9min)，同一样品连续进样第二次就不出峰。如果两个样品间进两个空白样（DI water)则不会出现上述问题。请哪位解释下这是什么原因？非常感谢。。。。我是新手只有5个金币。。。
HPLC: Agilent 1200
Column: 5 µm LiChrospher RP-18, 4.6mm * 250mm
Injection volume: 50µL
Flow rate: 1mL/min
Mobile phase: acetonitrile and water
Gradient: 0 min, 90% water and 10% acetonitrile
              20 min, 50% water and 50% acetonitrile
              30 min, 0% water and 100% acetonitrile
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1楼 2014-09-16 02:07:05
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daisyzhangwei

木虫 (职业作家)

不曾来过……

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lilianli1986: 金币+5 2014-09-18 07:37:52
你的梯度条件设置的不好
一般正常情况，一个反相的条件最后不会到纯的有机相里面去，另外你完全可以把中间50%的甲醇比例提高一些
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人生若只如初见...
4楼2014-09-16 09:26:27
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匿名

禁虫 (知名作家)
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2楼2014-09-16 06:22:52
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匿名

禁虫 (知名作家)
★ ★
费姚永芬: 金币+2, 欢迎常来分析版交流 2014-09-16 09:18:53
本帖仅楼主可见
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3楼2014-09-16 06:24:22
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lilianli1986

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by shen2003 at 2014-09-16 06:24:22
在30分钟后面加一个初始比例的10分钟左右的平衡
...

谢谢！那平衡的目的是什么？比如样品出峰在10分钟以后，那是否需要设置初始比例10分钟左右的平衡？看我的结果是应该设置。。但我不太明白平衡的目的是什么？有什么可以推荐的资料么？HPLC我是新手。。。。非常感谢
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5楼2014-09-18 07:36:02
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