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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】谁能告诉我
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神仙糊涂

[交流] 【求助/交流】谁能告诉我

前端时间PCR产物去测序，同时我提供了上下游引物，但是结果是我的引物和我的产物不反应，我只有1对引物，决不可能弄错，请教各位高手，这是什么原因啊？实在摸不到头绪啊

[ Last edited by 神仙糊涂 on 2008-4-20 at 09:21 ]
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1楼 2008-04-19 23:28:45
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
晕,测序引物要求是比较高的,不是说你用来PCR就可以用来测,所以还是看你引物的问题吧,如果引物不太好,可以试着连接进入T载体后用T上的通用引物测,这样比较好,还可以测到两个头上的序列,呵呵
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2楼2008-04-20 11:41:57
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greenspringmi

银虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
1、先把测序的条件再优化一下，主要是把测序时的PCR反应的退火温度做适当调整
2、调整后仍然不能反应的话，就把你的目的片断连接到T载体上后，用质粒测序吧。T载体上的测序引物是设计好的，直接合成来用就可以了。
    但是你的目的片断要有A尾巴才可以连接T载体！如果没有A尾巴，可以再做个PCR反应加上A尾巴。
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3楼2008-04-20 11:58:29
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神仙糊涂

谢谢轻5飞扬和greenspringmi，我受益匪浅。
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4楼2008-04-22 16:18:53
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