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[求助]shRNA转染问题
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大家好，我在RNAi实验中碰到了很大的困扰，请高手帮帮忙吧 我的实验主要是通过脂质体（Lipofectamine 2000）将shRNA质粒转进胃癌细胞，从而实现目的基因敲除；有乱序shRNA质粒做对照，转染效率是通过质粒上的GFP的表达来判定的。质粒提取试剂盒是天根的大抽试剂盒。 实验安排是这样的：未处理组，只加脂质体组，只加质粒组，乱序质粒组，处理组。 转染24h后，光学显微镜下可以明显看到乱序质粒组和处理组细胞死了一大片，而其它组的细胞生长都很好。 流式细胞仪检测GFP表达情况时却发现乱序组和处理组的转染效率不一样，乱序组可以达到83％，而处理组只有42％。 理论上乱序组的细胞是不会死亡的。shRNA的载体是从国外拿过来的，国外的实验室他们用乱序质粒时没有出现细胞死亡的现象。 我的实验问题到底出在哪里呢？大家帮帮忙吧。 |
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