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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 转化后做蓝白斑筛选，平板长出蓝白斑后挑取白班PCR鉴定阴性，是什么原因？
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zwss

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们一般是先把白菌落挑到一个新板上，然后做菌落PCR，可能由于连接的比例不好出现自连 所以有阴性结果很正常，可以多挑几个 或者调整下连接的比例。
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11楼2014-09-10 10:14:04
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potatobing

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by zwss at 2014-09-10 10:14:04
我们一般是先把白菌落挑到一个新板上，然后做菌落PCR，可能由于连接的比例不好出现自连 所以有阴性结果很正常，可以多挑几个 或者调整下连接的比例。

小白请问菌落pcr是什么意思
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12楼2014-09-10 14:17:08
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌落PCR就是用单一菌落做模板PCR扩增。
看完全篇，有几点建议：
1是模板量太大了，菌落可以用灭菌的牙签或枪头沾取一下划线，然后放到PCR管里做模板。或者挑取菌落到培养基培养菌液（培养几个小时，看菌液是否浑浊）做模板（取1ul-2ul）。
2是挑斑可以多挑几个，以确保实验效率高。
3是鉴定还可以用酶切
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13楼2014-09-10 16:16:04
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