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CM sephadex C-25 超声20min，会不会破坏交联结构，需要确切答案
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前几天第一次用葡聚糖凝胶CM sephadex C-25做分离实验，没经验，超声了20min除气泡。有人说超声会破坏葡聚糖交联结构，但有些又说不会，到底会不会，为什么？ 最让我疑惑的是这个网址：http://baike.baidu.com/view/1410242.htm?fr=aladdin 这是交联葡聚糖凝胶的百度百科，居然公然在使用方法里讲到了超声脱气，这到底是怎么回事？ 附上百科的原文： 使用方法 1. 乙醇浸泡： 在室温下，将干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小时，并不断搅拌以保证凝胶溶胀，用无盐水洗去残存的乙醇滤干; 2.无盐水浸泡： 室温下，在无盐水中充分溶胀24小时，间隙搅拌，以保证凝胶的完全溶胀，然后； 3. 盐酸浸泡： 在常温下再用0.2N HCl浸泡12小时，间隙搅拌，滤干，水洗至中性； 4. 将溶胀好的凝胶脱气后（真空抽滤或超声波）根据装柱要求一次性置入柱内，注意保持湿态装柱，并避免柱内产生气泡或断层； 5. 上样前平衡层析柱至少3-5 个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的PH值等于上柱的Buffer 的PH值）； 6. 凝胶过滤的上样量一般为5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1-2%的床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20% 的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱高控制在40-50cm 以下，过高的凝胶层会引起较大的反压，应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1 即可； 7. 洗脱方法： 可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱；在上柱Buffer 中加入NaCl等梯度洗脱或盐梯度洗脱也可以完全分离纯化； 8. 在位清洗（CIP） 凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是以40cm/h 用1M 氢氧化钠反向洗四个柱体积，再以至少三个柱体积平衡缓冲液再生。 |
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