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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 引物GC含量高，怎么调整PCR体系？
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lu12306

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 踏实的心 at 2014-09-13 21:50:23
把退火温度往上调调看

调了，可能设的梯度差距有点大。还得重新整理一下。
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11楼2014-09-13 22:00:14
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wopopwz123

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
lu12306(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-14 09:20:41
你看一下你的序列，如果有连续的G或C，你要加点GC enhancer 宝生物有这个产品。否则你扩增出来的片段可能有错配的现象。
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12楼2014-09-14 00:15:55
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smdsfy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

模板是什么，浓度是多大？PCR没有条带跟模板的关系也很大，引物和模板是否匹配？
还有你可以优化一下镁离子的浓度，dNTP的浓度，还可以加3%的DMSO，尽量用稳定性强的pfu酶
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13楼2014-09-15 15:00:40
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lu12306

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by smdsfy at 2014-09-15 15:00:40
模板是什么，浓度是多大？PCR没有条带跟模板的关系也很大，引物和模板是否匹配？
还有你可以优化一下镁离子的浓度，dNTP的浓度，还可以加3%的DMSO，尽量用稳定性强的pfu酶

基因组DNA，浓度还可以，因为用它批出过其他耐盐基因。我把镁离子浓度降低了，加的7%的甘油，没批出来。我是以已知基因序列为模板设计的引物，不会扩增其他序列，特异性很高。按理应该可以批出条带。这东西还挺神奇的，感觉一切都妥妥当当，就是不出结果。真郁闷人。我想再换一对引物试试。太浪费时间了。
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14楼2014-09-15 20:08:21
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冰艺于欣然

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zuoyly at 2014-09-05 16:50:31
用PCR Enhancer就行，这个是专门针对GC含量高的引物设计的。

是诺唯赞的吗
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15楼2015-04-24 18:56:46
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玉兔Jane

新虫 (小有名气)
楼主，你的问题怎么解决的呢？我也是PCR扩不出来。
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16楼2016-07-05 10:25:06
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玉兔Jane

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 玉兔Jane at 2016-07-05 10:25:06
楼主，你的问题怎么解决的呢？我也是PCR扩不出来。

换了别的酶，扩出来了。
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17楼2016-07-06 18:52:52
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LaurenTing

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 玉兔Jane at 2016-07-06 18:52:52
换了别的酶，扩出来了。...

楼主，请问您换用了哪一种酶？
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18楼2018-11-28 10:28:54
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