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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助，关于DNA提取问题。
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hongkaichen

金虫 (小有名气)
哦，也就是说在上步加TE的时候就可以多加点TE溶解，那加多少RNAse呢？
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11楼2008-04-18 12:40:56
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xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧
好象基本上都是RNA ,要加RNase A
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12楼2008-04-18 13:41:09
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hfztim

至尊木虫 (正式写手)
sevenlight967　所说极是
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13楼2008-04-18 17:23:55
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hongkaichen

金虫 (小有名气)
RNase A是不是很贵呀？几次跟老师说要加点RNase ，他都说没必要，我是要做基因克隆，有可能这样并不影响结果吧他就说不用加了，上次又提了一次别的真菌的，附上图，应该有了，但RNA还是很多。
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14楼2008-04-18 18:07:49
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greenspringmi

银虫 (正式写手)
看了你的提取步骤，给你以下建议：
1、收集样品（待提取DNA的菌）后，尽量将水分去除干净（最好用吸水纸反复吸2-3次）
2、在用液氮研磨的时候加入CTAB适量，研磨一定彻底、充分，可以边研磨边加入液氮
3、研磨后收集菌，将菌收集在1.5ML 的 EP 管中，加入约300uL的CTAB ，混匀后水浴
4、65度水浴1个小时，每隔20分钟轻轻混匀一次，一定要轻柔
5、第4步之后不要离心，加入等体积的苯酚：氯仿（总体积600uL）
   需要注意的是：在研磨的时候CTAB的量不要超过300uL
6、混匀后离心，1，2000 rpm，30min
7、吸取上清，加入等体积苯酚：氯仿，混匀1，2000 rpm，20min
   注意可以在抽提蛋白的步骤里加入RNase
8、之后就是先用无水乙醇洗两次，在用70%的乙醇洗两次，之后将管内的乙醇充分晾干了，加入DNA的溶解液就可以了（一般用Millipore的水就可以了）
9、检测时上样3uL即可

看了你的胶图，觉得你的问题可能主要在于：1、研磨不充分
                                                            2、在水浴时混匀的太剧烈
                                                            3、蛋白抽提彻底
真菌的DNA比较容易提取的，加油啊！
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15楼2008-04-18 18:52:09
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xiaoyur

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by hongkaichen at 2008-4-18 18:07:
RNase A是不是很贵呀？几次跟老师说要加点RNase ，他都说没必要，我是要做基因克隆，有可能这样并不影响结果吧他就说不用加了，上次又提了一次别的真菌的，附上图，应该有了，但RNA还是很多。

最好加RNase A
肯定能去掉图片中长长的尾巴！！
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爱的反义词不是恨 而是冷漠!
16楼2008-04-18 19:10:09
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hongkaichen

金虫 (小有名气)
谢谢各位，我一定会努力提好！
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17楼2008-04-18 22:44:22
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