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hongkaichen

金虫 (小有名气)

哦,也就是说在上步加TE的时候就可以多加点TE溶解,那加多少RNAse呢?
11楼2008-04-18 12:40:56
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xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧

好象基本上都是RNA ,要加RNase A
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12楼2008-04-18 13:41:09
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hfztim

至尊木虫 (正式写手)

sevenlight967 所说极是
13楼2008-04-18 17:23:55
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hongkaichen

金虫 (小有名气)

RNase A是不是很贵呀?几次跟老师说要加点RNase ,他都说没必要,我是要做基因克隆,有可能这样并不影响结果吧他就说不用加了,上次又提了一次别的真菌的,附上图,应该有了,但RNA还是很多。
14楼2008-04-18 18:07:49
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greenspringmi

银虫 (正式写手)

看了你的提取步骤,给你以下建议:
1、收集样品(待提取DNA的菌)后,尽量将水分去除干净(最好用吸水纸反复吸2-3次)
2、在用液氮研磨的时候加入CTAB适量,研磨一定彻底、充分,可以边研磨边加入液氮
3、研磨后收集菌,将菌收集在1.5ML 的 EP 管中,加入约300uL的CTAB ,混匀后水浴
4、65度水浴1个小时,每隔20分钟轻轻混匀一次,一定要轻柔
5、第4步之后不要离心,加入等体积的苯酚:氯仿(总体积600uL)
   需要注意的是:在研磨的时候CTAB的量不要超过300uL
6、混匀后离心,1,2000 rpm,30min
7、吸取上清,加入等体积苯酚:氯仿,混匀1,2000 rpm,20min
   注意可以在抽提蛋白的步骤里加入RNase
8、之后就是先用无水乙醇洗两次,在用70%的乙醇洗两次,之后将管内的乙醇充分晾干了,加入DNA的溶解液就可以了(一般用Millipore的水就可以了)
9、检测时上样3uL即可

看了你的胶图,觉得你的问题可能主要在于:1、研磨不充分
                                                            2、在水浴时混匀的太剧烈
                                                            3、蛋白抽提彻底
真菌的DNA比较容易提取的,加油啊!
15楼2008-04-18 18:52:09
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xiaoyur

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by hongkaichen at 2008-4-18 18:07:
RNase A是不是很贵呀?几次跟老师说要加点RNase ,他都说没必要,我是要做基因克隆,有可能这样并不影响结果吧他就说不用加了,上次又提了一次别的真菌的,附上图,应该有了,但RNA还是很多。

最好加RNase A
肯定能去掉图片中长长的尾巴!!
爱的反义词不是恨 而是冷漠!
16楼2008-04-18 19:10:09
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hongkaichen

金虫 (小有名气)

谢谢各位,我一定会努力提好!
17楼2008-04-18 22:44:22
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