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MTT法 检测药物对细胞的生长抑制 ， 用哪种统计方法分析数据
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（实验结果处理 求助统计方法的选择） 96孔板上，用 不同浓度的 同一种药物 作用于 同一种细胞48hr后，MTT法测吸光度值，检验药物对细胞生长 的抑制作用 （一是看药物是否抑制细胞生长； 二 是看不同药物浓度对细胞的生长抑制 是否有差异）。 请问应该选择哪种统计方法 分析数据？ 数据示例 药物浓度 40 μm/L 20 μm/L 10 μm/L 5 μm/L 2.5 μm/L 空白对照 吸光度值（由4个平行孔得到的平均值） 0.075 0.083 0.095 0.658 1.344 1.504 |
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zzjcust
铁杆木虫 (正式写手)
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- 专业: 天然药物化学
3楼2008-04-17 13:57:27
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karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教！
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教！
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MTT实验吸光度最后要在0－0.7之间，超过这个范围就不使直线关系。 IC50是半抑制率，意思是抑制率50％的时候药物的浓度。把药品稀释成不同的浓度，然后计算各自的抑制率，以药品的浓度为横坐标，抑制率为纵坐标作图，然后得到50％抑制率时候的药品浓度，就是IC50。要点：药品稀释2倍，多做梯度，做点线图即可。 举个例子：各组浓度0.1，0.01，0.001，0.0001，0.00001，0.000001，稀释倍数为10，最大浓度为0.1，抑制率为0.95，0.80，0.65，0.43，0.21，0.06。带入 计算公式： Pm=0.95 Pn=0.06 P=0.95+0.80+0.65+0.43+0.21+0.06=3.1 Xm=log0.1=-1 lgI=lg0.1/0.01=1 lgIC50=-1-1*(3.1-(3-0.95-0.06)/4)=-3.6025 IC50=0.00025 有一个公式可以参考： LgIC50=Xm-I(P-(3-Pm-Pn)/4) Xm:Ig最大计量 I：Ig（最大剂量/相临剂量） P：阳性反应率之和 Pm:最大阳性反应率 Pn:最小阳性反应率 抑制率=1-加药组OD值/对照组OD值 公式中的最大最小阳性反应率就是最大最小抑制率 例 用96孔培养板SMMC－7721肝癌做MTT测细胞活力，应该加多少1640培养液，多少MTT和DMSO合适/根据书上说的加200ul1640,20ulMTT,150ulDMSO 加DMSO之前要尽量去掉培养液，便于DMSO溶解甲儧颗粒进行比色测定。 一般每孔4000各细胞为宜，既细胞浓度在20000个/ml.MTT加20ul, 作用四个小时后洗掉上清液体，注意不要将甲濽洗掉，然后每孔加150ul DMSO, 在脱色床上振荡10分钟，然后测吸光值。 一般要低于IC5，避免非凋亡性杀伤的细胞太多，造成流式细胞仪检测的碎片太多，我一般用1/2-1/3的IC50，作用时间为36小时，一般肿瘤细胞系空白处理的凋亡率应低于1％，用药后一般为5－10％（Annexin V），细胞周期的亚GO峰比较明显 |
2楼2008-04-16 23:04:04