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jia104559257铁虫 (小有名气)
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[求助]
甲醛法测氨基氮，为什么测得蛋白质酶解前后氨基氮含量没变化？ 已有1人参与
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请教大家个问题，我用木瓜蛋白酶和中性蛋白酶水解蛋白质 ，然后测氨基氮（甲醛滴定法），结果水解前后氨基氮含量基本没变化，两种酶酶解后都是同样的结果，问题出在哪里？结果：空白试验消耗标准0.05N的NAOH标液2.7mL左右，其它两组都在3.4mL左右（ps：两种酶酶解时pH、温度都在最适范围内，酶解时间2h）。求指点！ 注：酶解前，45℃和60℃酶解后，最后滴定消耗NAOH体积都差不多，难道是酶根本没起作用？（目标水解蛋白含量较高，两种酶活性都很高啊） 具体步骤： 称5.0g样品（粗蛋白含量22.41%），加15mL水，从中取5mL置于 100mL 容量瓶中，加水至刻度，混匀后吸取20.0mL，置于 200mL烧杯中，加水 60mL水，开动磁力搅拌器，用0.05N的NaOH标准溶液滴定至酸度计指示pH8.20，记录消耗NaOH的体积（mL）数(此为总酸含量);再加入10.00mL40%的中性甲醛，混匀。用上述NaOH标准溶液继续滴定至pH9.20。记录消耗NaOH标准溶液的体积（mL）数，同时做空白试验。 |
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【答案】应助回帖
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jia104559257: 金币+4, ★★★很有帮助, 谢谢。实验的时候酶用量为6000U/g底物蛋白！明天再加长时间试试。 2014-08-29 18:58:56
jia104559257(zybpxy代发): 金币+1, 欢迎继续关注此贴，问题解决后请点右下角通知版主处理，我们将发给悬赏金币，并给与一定鼓励 2014-08-29 21:03:36
答非所问: 金币+1 2014-08-30 10:52:18
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木瓜蛋白酶和中性蛋白酶都是内切蛋白酶，水解产物是多肽， 称5.0g样品（粗蛋白含量22.41%），加15mL水，然后水解2小时？如果是这样，底物浓度高，水解时间短，产物是多肽了，如果是底物浓度低点，水解时间长点，产物水解度会升高 |
2楼2014-08-29 18:07:15
