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汕头大学海洋科学接受调剂
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新虫 (初入文坛)

[交流] 关于培养基和内生菌分离 的问题 吡咯喹啉醌PQQ 已有1人参与

关于一篇“甲醇利用型产生吡咯喹啉醌PQQ的内生菌分离的文章”,求高手解答



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新虫 (初入文坛)

最近一直在研究一篇关于“甲醇利用型产生吡咯喹啉醌PQQ的内生菌分离的文章”,有个问题真是不懂。在网上也查不到好的方法,求高手解答一下



内生细菌被成功分离后,先用2种培养基进行培养:
     
   完全培养基:蛋白胨 10 g,NaCl 5 g,H2O 1000 mL,pH 7.0[68]。
     基本培养基:(NH4)2HPO4 3 g,K2HPO4 2 g,NaCl 1 g,烟酸 20 μg,VBl 10 μg,VB2 20 μg,泛酸钙 20 μg,吡哆醇 20 g,生物素10 μg,对氨基苯甲酸10 μg,MgSO4·7H2O,0.2 g,FeS04·7H2O 10 mg,H2O 1000 mL,MnSO4·H2O 5 mg[68]

“PQQ 产生菌的初筛
将供试菌株接种于装有10 mL 1%无水甲醇的基本培养基和1%无水甲醇的完全培养基的 50 mL 发酵管中,28℃、180 r/min 摇床培养 7 d,观察菌体生长情况,选择发酵液颜色由清澈变为红色的菌株。”


这一步就是初步鉴定此菌可以产出PQQ,但是为什么要用两个培养基呢?一个不就已经够了??他所说的变成红色,应该是两个培养液都能变成红色的才是合格的?

再进行复筛:

“挑取初筛菌株的单菌落,接入装有 10 mL MPQ 培养基的发酵管中,28℃、180 r/min,振荡培养 72 h,然后将全部培养液倒入装有 50 mL MPQ 培养基的三角瓶中,28℃、180r/min 振荡培养 7 d。
真空抽滤器抽滤弃菌体,上清液加入 3 倍体积的无水甲醇置于 4℃冰箱过夜,10 000r/min 离心 20 min 取上清,pH 调至 3.5。

MPQ 培养基:MgSO4 1.5 g,(NH4)2SO4 3 g,KH2PO4 1.4 g,Na2HPO4 3 g,柠檬酸铁 30 mg,CaCl2·2H2O 30 mg,MnCl2·4H2O 0.5 mg,ZnSO4·7H2O 5 mg,CuSO4·5H2O 0.5mg,H2O 1000 mL。” 随后就用HPLC进行PQQ值得测定。

不明白为什么换成这个培养基了,怎么不用基本培养基呢?这两个有什么区别?

“真空抽滤器抽滤弃菌体,”然后又加入“上清液加入 3 倍体积的无水甲醇置于 4℃冰箱过夜”, 这步还是发酵啊,怎么把菌体去掉了,滤纸过滤不了微生物,发酵液继续发酵培养,去菌体的目的是为了HPLC做准备???


谢谢大家。。~~~

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2楼2014-08-27 17:46:45
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隐冬之雪

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
MPQ培养基是用来发酵的,里面的很多微量元素对生产菌产PQQ有很大作用,尤其是亚铁离子的作用,至于之前的完全培养基和基本培养基,是用来富集及初步筛选的,毕竟甲醇利用型微生物相对较少。
真理是无路可循的国度
3楼2014-09-29 10:12:03
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