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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 枯草芽孢杆菌PCR扩增不出来的问题
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令狐少陈

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
梦锁深秋2005: 金币+2 2014-09-01 08:20:19
这种情况我也遇到过，感觉最后虽然P出来了，但也没找到核心问题，但是建议换酶试试，说实话，实验室很多人，最后这种问题解决的方法似乎都是换引物和换酶。
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多多交流，海纳百川
11楼2014-08-27 23:07:20
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梦锁深秋2005

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by a50044758 at 2014-08-27 22:55:53
换酶！反应体系里面加DMSO！

DMSO 按多少量加啊
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12楼2014-08-31 19:21:10
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梦锁深秋2005

银虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by loveerobin at 2014-08-27 16:57:48
多设计几对引物
进行梯度PCR扩增试试
另外，扩增基因不是提了ＲＮＡ反转录吗？

额。。。。本人没做过细菌，这个没有想到，回头去查查，多谢
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13楼2014-08-31 19:23:04
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梦锁深秋2005

银虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 令狐少陈 at 2014-08-27 23:07:20
这种情况我也遇到过，感觉最后虽然P出来了，但也没找到核心问题，但是建议换酶试试，说实话，实验室很多人，最后这种问题解决的方法似乎都是换引物和换酶。

酶倒是换过，结果倒是有条带，只是杂带相当多啊
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14楼2014-08-31 19:24:10
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a50044758

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 梦锁深秋2005 at 2014-08-31 19:21:10
DMSO 按多少量加啊...

终浓度的2%，50ul体系加1ul DMSO,介绍个挺厉害的酶你，phanta，扩的时候加上包装里面的PCR enhancer，我还没有遇到过P不出来的情况。
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15楼2014-08-31 22:59:06
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梦锁深秋2005

银虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by a50044758 at 2014-08-31 22:59:06
终浓度的2%，50ul体系加1ul DMSO,介绍个挺厉害的酶你，phanta，扩的时候加上包装里面的PCR enhancer，我还没有遇到过P不出来的情况。...

多谢
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16楼2014-09-01 08:19:57
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2015sky

新虫 (初入文坛)
我有个问题，我都已经鉴定出我的菌是某种乳酸菌了，但是再用该种菌的特异性引物PCR，就是没条带，是怎么回事呢，求大侠指点
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17楼2014-11-22 11:34:51
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