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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 帮我看看这是怎么了
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ahhflhz

金虫 (小有名气)

[交流] 帮我看看这是怎么了

Sample Text我是做Southern杂交的，质粒酶切作阳性，地高辛杂交有信号，而且亮度很高，但是我的PCR检测阳性的样品做了两次都没有信号，请各位高手帮我分析一下原因，非常感谢！



回答解决了问题的大侠将分享5个金币
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1楼 2008-04-15 09:52:04
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xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧
★
ahhflhz(金币+1,VIP+0):谢谢
无能为力，帮顶一下
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____/\~~~/\,----(..)/\____//|(\|(^\/___\/\||__||__|-"
2楼2008-04-15 13:13:58
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ahhflhz

金虫 (小有名气)
怎么没人帮我啊，各位虫虫帮帮我啊，
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3楼2008-04-16 11:01:42
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轻5飞扬

金虫 (正式写手)
★ ★
ahhflhz(金币+2,VIP+0):谢谢
呵呵,觉得PCR一般是不可信的,因为可能会有其它的因素影响
southern结果还是更加准确
不知道你DNA blot做的是什么样,是否为转基因的材料,如果是那你上面那个可以用两个探针去试,一个是抗性基因,另一个是你转进去的内源的基因,如果都检测不到,只能说明你的PCR有问题,这时就需要重新设计特异性高的引物去扩了
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4楼2008-04-16 14:18:46
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ahhflhz

金虫 (小有名气)
谢谢哦。我做的是转基因材料，PCR时阴性对照没有扩出条带阿，而且PCR阳性结果也没有杂带，所以很迷茫。
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5楼2008-04-16 16:02:35
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sevenlight967

银虫 (小有名气)
★ ★
ahhflhz(金币+2,VIP+0):谢谢
PCR 引物好用么？
做个阳性对照，比如质粒。
你是直接从genomic DNA上拉么？ 有时候是挺难拉的，PCR时加点DMSO。
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6楼2008-04-18 09:21:05
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ahhflhz

金虫 (小有名气)
阳性对照做出来了，探针摸板就是ＰＣＲ产物
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7楼2008-04-21 08:37:46
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ahhflhz

金虫 (小有名气)
实验还没有做出来，又做了白板，郁闷啊
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8楼2008-04-25 08:40:44
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随风而过

银虫 (小有名气)
你Southern杂交的结果不是有吗？你电泳加样量太大了吧？
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9楼2008-04-25 15:22:07
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ahhflhz

金虫 (小有名气)
虽然问题没解决，但是要谢谢各位虫虫，由于我不会发BB，所以请斑竹帮忙代发一下，每位就1.5个金币吧，呵呵
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10楼2008-04-28 21:22:12
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