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新盈记1989

银虫 (初入文坛)

[求助] 植物内生放线菌RAPD跑胶没结果,求高人指点迷津

我第一次做放线菌RAPD,实验室之前也没人做,所以实验室只有16s,没人做RAPD,摸着石头过河无人指导,有很多不解,希望大家指教,我做RAPD是因为SCI文章要求有新方法,我的文章即将提交,就差RAPD一个结果,结果也就是一句话,抽象说明三株菌的RAPD结果有什么差别,看看两株16s相似度高达99.98%的菌株及其最近相似度的菌株p出的条带有什么不同,不用之后的建树步骤,只求做出一张图来向老师交差,另外大论文用,不求精准,我用三种引物,同种体系及条件,跑胶无结果,想问下列问题
1,RAPD使用的酶是哪种,与20或40体系16sPCR一样么
2,RAPD引物放置有什么要求
3,镁离子是单独加的么,有什么量的要求,比例什么的
4,大家有做放线菌RAPD的帮忙找找合适的体系与条件,另外是每种引物对应一种体系与条件么,还是都是自己摸索的
5,跑胶时电压为多少
6,我做RAPD,加试剂步骤,跑胶什么的大多按16S步骤来,希望大家找点一下两者的区别

谢谢大家
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